돼지 대동맥 분리: 다운스트림 분석을 위해 미니어처 돼지에서 흉부 대동맥을 절제하는 수술 절차

초록

출처: Zhao, Y., et al. 미니어처 돼지에서 1차 대동맥 내피 세포의 분리 및 배양 J. Vis. Exp. (2019년)

이 비디오에서는 미니어처 돼지에서 대동맥을 외과적으로 제거하는 절차를 보여줍니다. 이러한 분리된 대동맥에서 채취한 내피 세포는 응고 및 면역 반응을 연구하기 위해 체외 조건에서 추가로 배양할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 돼지 대동맥 내피 세포 분리를 위한 수술 및 준비

1. 수술 전에 수술실을 자외선과 의료용 소독제 84액(사용 가능한 염소 함량은 4.0% - 5.0%, 재료 표)으로 1시간 동안 소독합니다.
2. 소형 돼지에게 15mg/kg 케타민, 15mg/kg 자일라진 염산염 및 0.05mg/kg 페나세틴 염산염(부피: 100μL/kg, 재료 표)으로 형성된 근육 주사를 투여한 후(그림 1A), 돼지의 통증 자극(예: 한쪽 귀 꼬집기 또는 한쪽 앞다리 흔들기) 및 생리적 지표(예: 혈압, 심장 박동과 호흡수).
   메모: 돼지가 깨어나는 징후를 보이면 돼지에게 또 다른 절반 용량의 주사를 놓을 수 있습니다.
3. 메스로 복부를 절제하고 하대정맥을 노출시킨 다음 5mL 주사기로 헤파린 나트륨(5,000U, 재료 표)을 하대정맥에 주입합니다.
4. 5분 후, 복부 대동맥에 카테터를 삽입하여 혈액을 공급하고 가슴 피부를 절개하고 메스로 횡격막을 절개한 다음 좌심실을 잘라냅니다.
   메모: 돼지는 혈액을 채혈하고 심장을 절단한 후 대동맥 맥박을 확인하여 안락사되었는지 확인하십시오.
5. 뼈 집게로 갈비뼈를 절제하고 (재료 표) 심장과 폐를 노출시킵니다. 심장과 폐 뒤쪽의 대동맥을 찾아 양쪽 끝을 조입니다. 예냉각된 세척 버퍼(1x PBS 용액(pH 7.4)와 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신으로 대동맥을 한 번 세척합니다. (그림 1B, C).
6. 가위로 대동맥을 잘라내고 대동맥의 양쪽 끝을 고정합니다. 멸균 집게와 가위로 대동맥 주변의 과도한 조직을 절제합니다. 대동맥을 50mL 원심분리 튜브에 넣고 미리 냉각된 세척 버퍼로 대동맥을 3x(세척당 30mL)로 세척한 다음 대동맥을 실험실로 옮깁니다(그림 1D).

결과

그림 1: 미니어처 돼지의 대동맥 수술 및 절제술. (A) 미니어처 돼지(Bama)의 사진. (B) 대동맥은 개복술과 개흉술 후에 노출됩니다. (C) 대동맥은 양쪽 끝에서 고정됩니다. (D) 대동맥을 냉세척 완충액이 있는 50mL 튜브에 넣습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
20 x PBS 용액 (pH 7.4, 뉴클레아제 무함유)	(주)상곤바이오텍	B540627#
75% 의료용 알코올	Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd. 중국
뼈집게	베이징 HeLi KeChuang 기술 개발 CO., Ltd. 중국	HL-YGQ
BOON 일회용 주사기 (10ml)	Jiangsu Yile Medical Article Co., Ltd. 중국
복합 케타민 주사	중국 선양의 수의학 제약 공장		케타민 염산염 : 0.3g / 2ml, 자일라진 염산염 : 0.3g / 2ml, 페나세틴 염산염 : 1mg / 2ml
집게	상하이 의료 기기 유한 공사 중국
헤파린 나트륨	Jiangsu WanBang biopharmaceutical Co., Ltd. 중국
요오드 팅크	Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd. 중국
미니어처 돼지 (Bama 또는 Wuzhishan)	Kang Yi Ecological Agriculture Co., Ltd, 중국
페니실린/스트렙토마이신	생명 기술	15070063#
가위	상하이 의료 기기 유한 공사 중국
수술용 메스	상하이 의료 기기 유한 공사 중국	22#