짧은 후방 섬모 동맥 분리: 돼지 눈에서 온전한 짧은 후방 섬모 미세혈관을 절제하기 위한 프로토콜

Abstract

출처: Perumal, N. et al., 안구 미세혈관의 질량 분광 기반 단백질체학 분석을 위한 샘플 준비. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 돼지 눈에서 짧은 후방 섬모 동맥을 분리하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 고립된 짧은 후방 동맥은 안구 혈관의 분자적 통찰력과 단백질 프로파일을 설명하기에 적합한 출처입니다.

Protocol

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 짧은 후방 섬모 동맥의 격리

돼지 눈과 시신경 및 안구 외 조직을 검시 직후 채취했습니다. 적출된 안구는 얼음처럼 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)에 담겨 실험실로 이송되어 즉시 사용되었습니다.

참고: 돼지의 눈은 기본적으로 전방(그림 1A)과 후방(그림 1B)으로 나뉩니다.

1. 얼음처럼 차가운 Krebs-Henseleit(K-H) 완충액이 들어 있는 해부실에 안구를 놓습니다. 날카로운 마요네즈 가위로 주변 근육과 조직을 조심스럽게 잘라냅니다.
   메모: Krebs-Henseleit(K-H) 완충액을 준비하려면 다음 화학 물질(NaCl 27.68g, NaHCO 8.4g, KCl 3,1.4g, MgSO₄ 1.18g 및 KH₂PO₄ 0.64g)을 건조하고 깨끗한 50mL 원추형 원심분리 튜브 1개에 넣고 CaCl₂

Results

그림 1: 돼지 눈의 대표적인 사진.

(A) 안구의 측면은 눈의 앞쪽에 위치한 각막, 공막, 주변 근육 및 시신경을 보여줍니다. (B) 눈의 후방에서 보면 시신경이 보인다. (C) 안구 뒤쪽에서 볼 수 있는 sPCA의 분지로, paraoptic 및 distal branches로 구성되어 있습니다. (D) 주변 지방 및 결합 조직과 격리된 sPCA.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
염화칼슘 이수화물(CaCl2)	칼 로스	5239.1	2.5 밀리미터.
둘베코의 인산염 완충 식염수(PBS)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	14190169
염화나트륨 (NaCl)	칼 로스	9265.2	118.3 밀리미터
탄산수소나트륨(NaHCO3)	칼 로스	965.3	25 밀리미터미터
α-(D)-(+)- 포도당 일수화물	칼 로스	6780.1	11 밀리미터미터
일회용 메스 #21	PFM 의료	200130021
해부 핀	칼 로스	47.1 파이
엑스트라 파인 본 가위	정밀 과학 도구	14084-08
Falcon 원뿔형 원심분리기 튜브(50mL)	피셔 사이언티픽	번호 14-432-22
메이요 가위, 터프 컷	정밀 과학 도구	14130-17
정밀 핀셋	정밀 과학 도구	11251-10	유형 5
정밀 핀셋, 매우 미세한 팁이 있는 스트레이트	칼 로스	LH53.1	유형 5
표준 패턴 겸자	정밀 과학 도구	11000-12
학생 Vannas 봄 가위	정밀 과학 도구	91501-09
Vannas 캡슐 절개술 가위	게우더	19760	스트레이트, 77 mm