뼈 감염의 토끼 모델 생성: 골수에 직접 박테리아를 주입하여 만성 감염을 유도하는 기술

초록

출처: Zhang, Y et al., 뼈 감염의 개선된 토끼 모델에서 반코마이신 적재 황산칼슘 및 자생 뼈 치료. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 박테리아의 누출을 방지하기 위해 뼈 왁스를 사용하여 토끼의 골수에 외과적으로 박테리아 감염을 유도하는 기술에 대해 설명합니다. 이 토끼 모델은 뼈 감염 치료 및 뼈 재생을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 뼈 감염 모델 준비

1. 생후 3개월 된 수컷 뉴질랜드 흰 토끼를 공기 조절 조건(20 ± 1 °C)과 12시간/12시간의 명암 조명 주기에서 개별 우리에 보관합니다. 매일 규칙적인 식단과 수돗물을 제공하십시오.
2. 수술 시 토끼의 체중이 3kg 이상인지 확인하십시오.
3. 토끼에게 펜토바르비탈 나트륨(체중 100g당 3mg)을 복강내 주사로 마취합니다. 토끼가 발 꼬집기에 반응하지 않아 완전히 마취되었는지 확인하십시오. 수술 과정에서 수술대에 토끼를 고정합니다.
   참고: 모델링 절차 시간이 1시간 미만인지 확인하십시오.
4. 전기 면도기를 사용하여 모발이 자라는 방향에 반대하여 근위 경골 부위를 면도합니다. 포비돈 요오드 용액을 바르고 피부를 소독한다.
5. 경골의 상단과 S. aureus 주입을 위한 드릴 구멍 위치(경골 상단까지의 거리는 1.5cm)를 펜과 자로 표시합니다. 드릴 구멍 위치가 경골 고원의 중앙에 수평으로 있는지 확인하십시오(그림 1A).
6. 11번 메스를 사용하여 경골 피부를 자르고 골막을 1cm 절개합니다(그림 1B, C). 전기 뼈 드릴 장치를 사용하여 경골에 직경 2mm의 구멍을 뚫습니다(그림 1D).
7. 경골 고원에 있는 직경 2mm의 구멍을 직경 2mm, 높이 2mm의 뼈 왁스 실린더로 누릅니다(그림 1E). 경골 고원의 수평면을 따라 여분의 뼈 귀지를 제거합니다(그림 1F). 2mm 구멍에 뼈 귀지가 가득 차 있는지 확인하십시오(그림 1G).
   메모: 혈액이 넘치거나 넘치지 않는 구멍을 확인하여 구멍에 뼈 귀지가 가득 차 있는지 확인하십시오.
8. 동물이 봉합사를 씹는 것을 방지하기 위해 수직 매트리스 봉합사에서 흡수성 외과용 봉합사로 골막과 피부를 꿰매십시오(그림 1H).
9. 1 x 10⁸ CFU/mL의 S. aureus 용액(체중 100g당 30μL)에 1mL 무균 주입기를 주입합니다(그림 1I). 바늘이 골지를 관통하는지 확인하고 S. aureus 용액을 골수에 천천히 주입합니다.
10. 모델링 후 열 손실을 방지하기 위해 동물을 따뜻하고 깨끗한 상태로 유지하십시오. 호흡수와 심박수를 모니터링합니다. 잠에서 깨어난 후에는 토끼를 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있는 개별 우리에 수용합니다.

결과

그림 1. 뼈 감염 모델의 외과적 준비.(A) 경골의 펀칭 위치를 보여줍니다. 황색포도상구균을 주입하기 위한 천공구멍 위치와 경골 상단까지의 거리는 1.5cm입니다. (B) 골막을 노출시키기 위해 피부를 절개합니다. (C) 경골을 노출시키기 위해 골막을 통해 절개한 부위를 보여줍니다. (D) 경골에 직경 2mm의 구멍을 뚫습니다. (E) 직경 2mm의 구멍에 뼈 왁스를 가득 채웁니다. (F) 여분의 뼈 귀지를 잘라냅니다. (G) 뼈 결손을 채우고 있는 뼈 왁스를 보여주세요. (H<...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
흡수성 외과용 봉합사	징환(京泉)	AN-번호 18S0604A
무균 주입기	징룽	20170501
뼈 왁스	에티콘	JH5CQLM
전기 뼈 드릴 유닛	바오 강	BKZ-1
전기면도기	코도스	3800
뉴질랜드 흰 토끼	저장성 실험동물센터	SCXK 2014-0047
No. 11 메스	위안리캉	20170604
펜토바르비탈 나트륨	머크	2070124
S. 아우레우스 동결 건조 분말	중국 일반 미생물 배양 수집 센터	ATCC 6538