토끼 배아 해동: 배아 이식을 위해 냉동 보존된 토끼 배아를 회수하기 위한 온난화 절차

초록

출처: Garcia-Dominguez, X. et al., 토끼 모델의 최적 배아 단계에서 최소 침습 배아 이식 및 배아 유리화. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오는 유리화 토끼 배아를 해동하는 절차와 최적의 배아 회복을 위한 예방 측정 단계를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 배아 온난화

1. 한 단계로 배아를 해동합니다.
   1. 미니 빨대를 액체 질소 증기에서 10cm 떨어진 곳에 수평으로 20-30 초 동안 놓습니다.
   2. 미니빨대 내부에서 결정화 과정이 시작되면 미니빨대를 25°C의 수조에 10-15초 동안 담급니다.
   3. 미니빨대 플러그를 제거하고 면 플러그를 자릅니다.
   4. 결합된 마이크로 디스펜서를 사용하여 BM에서 25°C에서 5분 동안 0.33M 자당 용액이 들어 있는 플레이트로 모든 미니스트로 내용물을 배출합니다.
      메모: 유리화(vitrification) 용액에 대한 배아 노출을 줄이기 위해 이 단계를 신속하게 수행해야 합니다.
   5. 배아를 BM 용액이 들어 있는 새 플레이트로 5분 더 이동합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
액체 질소	에어리퀴드	P1505XXX
페트리 접시, 35mm	시그마 알드리치	CLS430165-500개
플라스틱 드레싱 (노베쿠탄)	IBOR 메디카	7140028
플라스틱 빨대 0.25 mL	IMV - 기술	6431
가위	로보즈	RS-5880	모든 일반 수술 등급의 강철 작은 직선 가위가 작동합니다.
멸균 장갑	Alvet Escartí	087GL010075
멸균 가운	Alvet Escartí	12261501
멸균 마스크	Alvet Escartí	058B15924B
밀짚 플러그	IMV - 기술	6431
자당	시그마 알드리치	S7903
물목욕	라이파	배-4
둘베코의 인산염 완충 식염수(DPBS)	시그마 알드리치	D5773	염화칼슘 없음.

의 의 (영어)