CreER-LoxP 시스템 기반 표적 유전자 불활성화: 마우스 모델에서 표적 유전자 녹아웃을 위한 타목시펜 유도성 Cre 재조합효소 시스템

초록

출처: Hubner, E. K., et al. 유체역학적 꼬리 정맥 주사를 사용한 마우스 간세포의 유전적 생체 내 변형을 위한 구성 및 유도 시스템.J. Vis. 특급 (2018년)

이 비디오는 마우스 모델에서 타목시펜의 복강 내 주입 후 타목시펜 유도 Cre-recombinase 시스템을 사용하여 표적 유전자 녹아웃을 수행하는 절차를 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. Tamoxifen을 사용한 Transfected CreER 유도

주의: 타목시펜은 해롭거나 암성이거나 생식력을 손상시킬 수 있습니다. 물질안전보건자료를 참조하십시오.

1. 3일 연속으로 복강내 타목시펜 주사를 계획합니다.
2. 1일차에 타목시펜 10mg을 40μL 에탄올에 녹입니다. 55°C에서 10분 동안 배양합니다. 타목시펜이 녹을 때까지 여러 번 소용돌이칩니다.
3. 960μL 옥수수 기름을 추가합니다. 55 ° C에서 5 분 동안 배양하십시오. 명확한 해결책을 얻기 위해 여러 번 소용돌이를
일으킵니다.
4. 1G 바늘이 있는 27mL 인슐린 주사기에 용액을 준비합니다.
5. 엄지와 두 번째 손가락으로 마우스의 목을 조심스럽게 잡고 손바닥 부분과 네 번째 및 다섯 번째 손가락 사이에 꼬리를 고정하여 마우스를 긁습니다.
6. 용액 0.1mL(= 타목시펜 1mg)를 복강 내 복부의 왼쪽 아래 사분면에 주입합니다.
7. 2일차와 3일차에 주사를 반복하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Injekt 주사기 F 1 ml	브라운	9166017V	복강내 주사용
타목시펜	시그마-알드리치	T5648-1G	CreER 활성화의 경우
옥수수 기름	시그마-알드리치	C8267-500ML	타목시펜 주사용 캐리어