방법 논문

Inducible Tet-On 조절 가능한 시스템 기반 유전자 발현 In Vivo: 마우스 모델에서 표적 유전자 전사 활성화를 위한 테트라사이클린 유도 유전자 발현 시스템

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

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출처: Hubner, E. K. et al.유체역학적 꼬리 정맥 주입을 이용한 마우스 간세포의 유전적 생체 내 변형을 위한 구성 및 유도 시스템. J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오는 마우스 모델의 테트라사이클린 또는 Tet-On 유전자 발현 시스템을 보여줍니다. 테트라사이클린 유도체인 독시사이클린(doxycycline)이 존재할 때, 역테트라사이클린(reverse tetracycline)으로 제어되는 트랜스액티베이터(transactivator) 단백질로 구성된 Tet-On 시스템이 활성화되고 관심 유전자를 발현합니다.

프로토콜

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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 테트라사이클린 의존성 유전자 또는 shRNA 발현 유도

주의: 독시사이클린은 해로울 수 있습니다. 물질안전보건자료를 참조하십시오.

참고: 실험의 유형과 기간에 따라 독시사이클린을 식수로 공급할 수 있습니다.

  1. 단기 실험(<10일)의 경우 다음 프로토콜을 사용하여 음용수를 통해 독시사이클린을 투여합니다.
    1. 수돗물 100mL에 자당 5g을 녹입니다. 오토 클레이 브.
    2. 100mg의 독시사이클린-히클레이트를 15mL 원뿔형 튜브에 5mL의 자당 용액(단계 1.1.1)에 용해시킵니다.
    3. 10mL 주사기를 사용하여 0.2μm 필터를 통해 용액을 멸균 여과합니다. 1.1.1단계에서 준비한 자당 용액에 첨가합니다.
    4. 독시사이클린-수크로오스 용액을 마우스에 식수로 공급합니다. 매일 확인하고 용액이 흐려지면 박테리아 과증식을 나타냅니다(늦어도 3일 후에 투명한 용액으로 교체).

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공개 사항

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선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
D(+)-당류칼 로스4621.1독시실린 용액의 감미료를 위해
독시사이클린 하이클레이트애플리켐A2951,0025테트라사이클린 의존성 발현의 활성화
Injekt 10ml 주사기브라운4606108V
필트로푸르 S 0.2사르슈테트831.826.001독시사이클린의 여과용

재인쇄 및 허가

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태그

Tet On

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