Von Kossa 대동맥 혈관 평활근 세포의 염색: 동맥 내측 석회화 평가를 위한 체외 기술

초록

출처: O'Rourke, C., et al. 혈관 평활근 세포의 석회화 및 대동맥 석회화 및 염증의 영상. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 in vitro에서 혈관 평활근 세포의 동맥 내측 석회화를 평가하기 위한 염색 기술을 보여줍니다. 폰 코사 (von Kossa) 방법은 광화학 반응을 사용하여 석회화 부위에 금속성 은을 증착시키고 검은 색을 부여합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 시약의 준비

1. 쥐 대동맥 VSMC의 분리 및 석회화
   1. 대동맥 소화 솔루션:
      1. 175 U/ml 타입 2 콜라겐 분해효소와 1.25 U/ml 엘라스타아제를 함유한 Hank's Balanced Salt Solution(HBSS)으로 새로운 용액(수확한 대동맥당 ~3-5ml)을 준비합니다. 0.22μm 진공 구동 여과 시스템으로 용액을 멸균하고 사용할 때까지 용액을 얼음 위에 보관하십시오.
   2. 세포 매체:
      1. Dulbecco의 DMEM(Modified Eagle Medium) 500ml에 10% 소 태아 혈청, 100 units/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 보충합니다. 사용하기 전에 매체를 37°C로 예열하십시오.
   3. 석회화 매체:
      1. 석회화 매체 A(NaPhos, 마우스 세포주에 사용):
         1. 100-500ml의 DMEM(필요에 따라 부피)을 10% 소....

결과

그림 1: 야생형 마우스의 대동맥 해부.(A) 흉부 및 복부 대동맥이 총장골동맥 분기점까지 확장되는 사진은 위에 있는 장기와 대동맥 주위 지방을 제거한 후 묘사된 것입니다. (B) 상완동맥, 좌측 총경동맥 및 좌측 쇄골하 동맥이 있는 대동맥궁에 대한 집중적인 보기. 스케일 바 = 1mm.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
15ml 원뿔형 튜브	송골매	352096
알파 평활근 actin 항체	시그마	SAB2500963
챔버 슬라이드	Nunc 랩텍	154461
콜라겐 분해 효소, 유형 2	워 딩 턴	LS004176
덱사메타손	시그마	D4902
둘베코의 변형된 독수리 매체	생명 기술	11965-084
엘라스타제	시그마	1250회
소 태아 세럼	지브코	제16000-044
겸자, 가는 점	로보즈	RS-4972
집게, 톱니 모양의 전체 곡선	로보즈	RS-5138
포르말린 (10%)	전자 현미경 과학	15740
Hank's Balanced Salt 솔루션	지브코	제14025-092
바늘이 있는 인슐린 주사기	테루모	SS30M2913
L-아스코르브산	시그마	A-7506
미세해부 용수철가위(13mm)	로보즈	RS-5676
미세해부 용수철 가위(3mm)	로보즈	RS-5610
생리식염수	호스피라	TEL:TEL:0409-4888-10
핵 빠른 빨간색	시그마-알드리치	N3020
페니실린/스트렙토마이신	코 닝	30-001-CI
질산은(5%)	리카 화학 회사	6828-16
인산나트륨 이염기성 헵타하이드레이트	시그마-알드리치	에스-9390
티오황산나트륨	시그마	에스-1648
ß-글리세로인산염 디소듐 염 수화물	시그마	G9422
조직 배양 플라스크, 25cm2	송골매	353108
조직 배양 플레이트(35mm x 10mm)	송골매	353001
조직 배양 플레이트, 6웰	송골매	353046
트립신	코 닝	25-053-CI
진공 구동 여과 시스템	밀리포어	SCGP00525

년 호 년 호 년