유충 초파리 포도 세포의 지질 방울 염색: BODIPY 기반 염료를 사용하여 정상 및 스트레스 조건에서 지질 방울 축적을 평가하는 기술

초록

출처: Wei, C., et al., 초파리 유충에서 Oenocytes의 해부 및 지질 방울 염색. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 친유성 형광 BODIPY 기반 염료를 사용하여 Drosophila 유충 난소세포(간세포 유사 세포)에서 지질 방울 염색을 보여줍니다. 이 세포는 발달 과정과 기아와 같은 환경 스트레스에 대한 반응으로 지질 대사를 연구하기 위한 모델 역할을 합니다.

프로토콜

1. 유충을 위한 굶주림 치료

참고: 세 번째 instar 유충의 경우, 정상적인 섭식 조건에서는 난소세포에서 검출할 수 있는 지질 방울이 거의 없거나 전혀 없지만, 굶주림과 같은 스트레스 조건에서는 난세포에서 수많은 큰 지질 방울이 유발될 수 있습니다. 이 방법을 추가로 검증하기 위해서는 이러한 유충을 전처리하여 토양 세포에서 지질 방울 생물 발생을 유도할 필요가 있습니다. 여기에서는 12시간, 24시간, 36시간의 굶주림 시간 코스를 패러다임으로 선택했습니다. 특히, 짧은 기간의 결핍(예: 3시간)은 토양 세포에서 검출 가능한 지질 방울을 유도하기에 충분합니다. 굶주림 기간은 특정 실험 목표와 설정에 따라 달라질 수 있다.

1. 굶주림을 위한 방을 만들고 치료를 조절하십시오.
   1. 기아 치료 챔버의 경우: 6cm 페트리 접시에 적절한 크기의 여과지를 놓고 여과지에 PBS 1mL를 피펫으로 넣습니다.
   2. 대조군 처리 챔버의 경우: 페트리 접시에 블루밍턴 표준 옥수수 가루 식품 5mL를 넣습니다.
2. 주걱을 사용하여 아직 음식에 굴을 파고 있는 유충이 들어 있는 음식의 최상층을 부드럽게 파내고 P....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
50 mL 원심분리기 튜브	코 닝	430829	50 밀리리터
6cm 페트리 접시	써모 피셔	150326	6cm
한천			플라이 푸드의 경우
알루미늄 호일	해당 사항 없음	해당 사항 없음	빛으로부터 단풍 보호
보디피 493/503	인비트로젠	D3922	지질 방울 염색 염료
컨포칼 현미경	라이카	라이카 TSC SP5	컨포칼 이미징
옥수수 시럽			플라이 푸드의 경우
옥수수 가루			플라이 푸드의 경우
커버슬립	시토글라스	10212424C	20 × 20mm, 0.13-0.17 두께
해부 핀	해당 사항 없음	해당 사항 없음
해부 플레이트	해당 사항 없음	해당 사항 없음
여과지	해당 사항 없음	해당 사항 없음	지름 : 11 cm
정착 완충액	해당 사항 없음	해당 사항 없음	4% 파라포름알데히드(PFA) 1x PBS (PBS)
집게	뒤몽	11252-30	#5
부 화기	강남(江南)	재질 보기 SPX-380	파리 문화용
마이크로 원심분리기 튜브	액시겐	MCT-150-C	1.5 밀리리터
현미경 슬라이드	시토글라스	10127105P-G
장착 매체	VECTASHIELD안티페이드 마운팅 보통	H-1000	안티페이드 마운팅 매체
매니큐어	팬에라	AAPR419	커버슬립 밀봉
화필	해당 사항 없음	해당 사항 없음
PBS (PBS)	해당 사항 없음	해당 사항 없음	PBS(137mM NaCl, 2.7mM 1개 KCl, 10mM Na_{2} HPO_{4}, 1.8mM KH_{2} PO_{4}, pH 7.4)
회전자	Kylin-Bell 실험실 기기	WH-986
시저	Smartdata 의료	SR81	Vannas 봄 가위
콩			플라이 푸드의 경우
주걱	해당 사항 없음	해당 사항 없음
표준 옥수수 가루 식품	해당 사항 없음	해당 사항 없음	블루밍턴 표준에 따라 옥수수 가루 음식 조리법
실체 현미경	라이카	라이카 S6E	조직 해부용
종이 닦기	해당 사항 없음	해당 사항 없음
효모			플라이 푸드의 경우

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