아밀로이드 침전물의 hFTAA 염색: 조직 절편에서 형광 이미징을 위해 올리고티오펜 기반 염료를 사용하여 아밀로이드 피브릴을 시각화하는 기술

초록

출처: Nyström, S. et al., 초분광 공초점 현미경 및 형광 수명 이미징에 의한 발광 접합 올리고티오펜으로 염색된 아밀로이드 조직 이미징. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 형광 이미징을 위해 발광 결합 올리고티오펜 염료(헵타머-포르밀 티오펜 아세트산 또는 hFTAA)를 사용하여 조직 절편의 아밀로이드를 염색하는 기술에 대해 설명합니다. 아밀로이드는 β장이 풍부한 비정상 단백질 응집체입니다. 조직 샘플에서 이들을 검출하면 아밀로이드 관련 질환 또는 단백병증의 진단 및 치료에 도움이 됩니다.

프로토콜

1. LCO 염색 용액

참고: 상업용 공급업체에서 hFTAA를 구매한 경우 섹션 1 대신 공급업체의 지침을 따르십시오.

1. 동결건조된 hFTAA를 2mM NaOH에 재현탁시켜 1mg/mL의 원액을 준비합니다. 육수를 4°C의 유리병에 보관합니다. 재고는 1년 동안 보관할 수 있습니다.
2. 염색 당일에는 인산염 완충 식염수(PBS)에 스톡을 1:10,000으로 희석하여 작업 용액을 준비합니다.

2. 조직 샘플의 준비

참고: hFTAA를 아밀로이드 마커로 사용하여 많은 조직 유형을 이미지화할 수 있습니다. 예는 그림 1을 참조하십시오. hFTAA는 응집체 형태에 민감합니다. 따라서 염색은 항원결정기에 노출되지 않은 중단되지 않은 응집체에서 수행하는 것이 바람직합니다. 최적의 스펙트럼 품질은 조직 고정이 최소로 유지되는 경우 달성됩니다. 따라서 염색 시 에탄올에 부드럽게 고정된 신선한 냉동 재료가 선호됩니다. 그러나, 예를 들어 포르말린으로 고정된 조직에서도 아밀로이드 침착물을 검출할 수....

결과

그림 1: h-FTAA 염색을 보여주는 다양한 조직 유형 및 단백질 응집체: (a) 간 내 케라틴 응집체로 구성된 Mallory-Denk 몸체(DAPI로 대조염색), (b) 산발성 봉입체-신체 근염(s-IBM) 근육 조직에서 p62-양성 r 함유, (c) 인간 췌장에서 섬 아밀로이드 폴리펩티드의 아밀로이드, (d) 인간 장에서 면역글로불린 경쇄의 아밀로이드, (e) 마우스 뇌의 양 스크래피(프리온), (f) 마우스 뇌의 만성 소모성 질환(프리온), (g) APP23 마우스 뇌의 Aβ 플라크, (h) APP/PS1 마우스 뇌의 Aβ 병리학,.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
hFTAA/아미트래커545	에바 바이오텍
Dako 형광 장착 매체	애질런트 기술	GM304
라이카DM6000	라이카
루멘 200	이전의
스펙트라뷰 시스템	ASI 스펙트럼 이미징