쥐 뇌 조직 절편의 TTC 염색: 허혈-재관류 손상 후 조직 절편에서 생존 가능한 조직과 괴사 조직을 구별하기 위한 염색 절차

초록

출처: Liepinsh, E., et al. 허혈-재관류 후 디지털 매크로 사진을 위한 설치류 심장 및 뇌 조직 준비. J. Vis. 특급 (2022)

이 비디오는 쥐의 뇌 조직 절편을 시각화하고 중대뇌동맥 폐색 및 재관류 후 생존 가능한 조직과 손상된 조직을 구별하기 위한 2,3,5-트리페닐-2H-테트라졸륨 클로라이드 염색 절차를 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 뇌 염색 및 슬라이싱

1. 중대뇌동맥 폐색 실험 후 두개골에서 뇌간을 포함한 뇌를 제거하고 얼음처럼 차가운 PBS로 씻습니다.
2. 동물의 체중에 따라 뇌 스테인리스강 매트릭스의 올바른 크기를 선택하십시오(표 1B 참조). 뇌의 복부 쪽이 위로 향하게 하여 뇌를 뇌 매트릭스에 넣습니다.
   메모: 매트릭스에 안착할 때 뇌의 복부 표면은 곰팡이의 상단 표면과 평행해야 합니다.
3. 칼날을 사용하여 뇌의 전두부와 꼬리 부분(양쪽에서 2개의 면도날)을 제한합니다.
   메모: 매트릭스 호환 면도날을 절단해야 합니다. 일반적으로 호환 가능한 단일 가장자리 면도날(최대 0.01인치(0.254mm) 두께)을 쥐의 뇌 절단에 사용할 수 있습니다.
4. 블레이드를 부분적으로(뇌를 완전히 절단하지 않음) 첫 번째 블레이드와 마지막 블레이드 사이의 채널에 넣습니다. 모든 칼날이 삽입되고 평행하게 배열되면 모든 칼날을 손바닥으로 동시에 눌러 뇌를 2mm 관상 조각으로 자릅니다.
5. 두 손가락으로 칼날의 측면을 단단히 잡고 매트릭스에서 얇게 썬 뇌와 함께 칼날을 제거합니다.
6. 트레이(70mL, 72 x 72mm)에 뇌 조각을 하나씩 배열합니다. 슬라이스를 배열할 때 각 슬라이스의 앞쪽 표면이 항상 위를 향하도록 하십시오.
7. PBS의 따뜻한 (+37 °C) 1% TTC 용액을 뇌 절편에 붓고 어두운 곳에서 37°C에서 8분 동안 배양합니다.
   메모: 뇌 절편은 배양 중에 TTC 용액에 완전히 담가야 합니다.
8. 1% TTC 용액에서 배양 후 뇌 절편을 파란색 플라스틱 트레이로 옮겨 이미지를 캡처합니다. 뇌 절편을 전두엽에서 꼬리 부분까지 순차적으로 배열하고 메스를 사용하여 시상면의 반구를 분리합니다.

결과

그림 1: 쥐의 심장과 뇌 절단에 대한 매트릭스. (A) 쥐의 심장, (B) 쥐의 뇌.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)	시그마-알드리치	298-96-4
성인 쥐 뇌 슬라이서 매트릭스	Zivic 악기	BSRAS001-1
단일 가장자리 면도날	Zivic 악기	BLADE012.1
Sony Alpha a6000 미러리스 디지털 카메라	소니	ILCE6000	모든 최신 디지털 카메라로 다시 볼 수 있습니다
수술용 칼날	Heinz Herenz, 함부르크, 독일	BS2982
계량 트레이, 70 mL	사르스테드	71,99,23,212
써모-셰이커	바이오산	PST-60HL-4
치아 조직 겸자	아그토스	11021-12
소금	Fisher 바이오시약	BP358-10
커버 유리 집게, 각진	정밀 과학 도구	11073-10