은 염색 황화 글리코사미노글리칸의 염색: 폴리아크릴아미드 겔에서 황화 글리코사미노글리칸의 시각화를 위한 염색 방법

초록

출처: LaRiviere, W. B., et al. 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 은 염색에 의한 글리코사미노글리칸 검출. J. Vis. 특급 (2021년)

이 비디오에서는 황산화 글리코사미노글리칸 올리고당 단편의 알시안 블루 및 실버 결합 염색 절차를 보여줍니다. 이 결합된 염색 기술은 폴리아크릴아미드 겔에서 서로 다른 길이의 글리코사미노글리칸 중합체 띠를 크게 증폭시킵니다.

프로토콜

1. 은 염색 프로토콜

1. 은 염색에 필요한 모든 용액을 미리 준비하십시오(표 1).
   메모: PAGE 젤이 염색되고 현상되어 정지 용액에 들어갈 때까지 PAGE 젤을 직접 만지지 마십시오. 대신 깨끗한 플라스틱이나 유리 도구를 사용하여 젤을 조작하십시오. 젤을 직접 만지면 염색 후 젤에 지문 왜곡 및 기타 눈에 띄는 아티팩트가 생깁니다.
2. 실행이 완료되면 카세트를 분해하고 탈이온수, 여과수로 채워진 깨끗한 중대형 용기에 젤을 추출합니다.
   메모: 젤을 직접 만지지 않으려면 피펫 팁이나 다른 플라스틱 물체를 사용하여 물에 잠긴 상태에서 카세트에서 젤을 부드럽게 벗겨냅니다. 젤은 깨지기 쉬울 수 있으므로 조심스럽게 다루십시오.
   1. 물을 버리십시오. Alcian blue 염색 용액에 겔을 5분 동안 염색합니다.
   2. 알시안 블루 얼룩은 버리십시오. 대부분의 Alcian blue 염색 용액이 제거될 때까지 탈이온화되고 여과된 물로 2-3x 빠르게 헹궈내거나 세척합니다.
   3. 로커에서 밤새 탈이온되고 여과된 물....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
알시안 블루 8GX (단색)	써모피셔 사이언티픽	AC400460100
수산화암모늄(액체)	써모피셔 사이언티픽	A669S-500	ACS 인증
Barnstead GenPure Pro 정수 시스템	써모피셔 사이언티픽	10-451-217PKG	모든 물 탈이온화/정화 시스템은 허용되는 대체품입니다
빙초산(액체)	써모피셔 사이언티픽	대답35-500	ACS 인증
메탄올(액체)	써모피셔 사이언티픽	A412-500	ACS 인증
질산은(고체)	써모피셔 사이언티픽	시즌 181-25	ACS 인증
수산화나트륨(고체)	써모피셔 사이언티픽	S392-212
진공 필터 장치, 일회용, 0.22uM 기공 PES, 500mL 용량	써모피셔 사이언티픽	569-0020	대체 용량 및 필터 재료 허용
Molecular Imager Gel Doc XR 시스템	바이오 라드	제170-8170	모든 유사한 겔 이미징 시스템은 허용 가능한 대체품입니다

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