Papanicolaou 염색: 난관 세포의 세포학적 특징을 시각화하는 기술

초록

출처: Chen, H. et al. 난소암 조기 발견을 위한 유망한 도구로서의 나팔관의 난관 세포학. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오에서는 난관 세포학을 연구하기 위해 Papanicolaou 염색의 수정된 프로토콜을 보여줍니다. 이 기술은 악성 및 비악성 나팔관 상피 세포의 세포학적 특징을 시각화하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

1. 수정된 Papanicolaou 염색 프로토콜

1. 표 1.
   와 같이 자동화된 non-gyn stain 절차를 실행하여 조직이 번진 슬라이드를 염색합니다. 참고: 염색 방법은 비부인과 검체에 일상적으로 사용하는 Papanicolaou 염색 기술의 변형을 나타냅니다. 우리는 자동화된 조직 처리기를 사용하여 일부 슬라이드를 염색합니다. 본 연구에서는 Gyn 염색 절차보다 Non-Gyn 염색 절차를 선택했습니다. 사용된 Eosin은 부인과 검체(자궁경부 도말 검체)에 사용되는 EA-50 대신 EA-65입니다. 또한, 주로 편평 세포 염색을 위한 Gyn 염색 절차의 OG-6는 본 연구에서 편평 세포를 볼 수 없을 것으로 예상되기 때문에 염색 절차에 포함되지 않습니다. EA65(Eosin Azure)는 Eosin Y, Fast green FCF 및 Bismarck brown Y의 3가지 염료로 구성된 카운터 스테인 솔루션입니다. 절차는 표 1에 설명되어 있습니다.
2. 다음과 같이 수동 빠른 자궁경부 염색 절차를 수행합니다.
   1. 조직이 번진 슬라이드를 95% 에탄올에 10회 담그고 각 담그는 데 약 1초가 걸립니다.
   2. 슬라이드를 H₂O에 10회 담그고 각 담그는 데 약 1초가 걸립니다.
   3. 10 - 60 초 동안 hematoxylin에서 슬라이드를 나옵니다.
   4. 슬라이드를 H₂O에 10회 담그고 각 담그는 데 약 1초가 걸립니다.
   5. 슬라이드를 95% 에탄올에 10회 담그고 각 담그는 데 약 1초가 걸립니다.
   6. EA65에서 1 - 3분 동안 슬라이드를 이머지합니다.
   7. 슬라이드를 H₂O에 10회 담그고 각 담그는 데 약 1초가 걸립니다.
   8. 슬라이드를 95% 에탄올에 10회 담그고 각 담그는 데 약 1초가 걸립니다.
   9. 슬라이드가 투명해질 때까지 슬라이드를 자일렌에 담그십시오.
      참고: 이것은 수정된 Papanicolaou 염색 절차입니다. 이 방법은 현장 미세침 흡인 및 STAT 표본과 같이 시간이나 공간이 제한된 경우에 보다 빠른 염색 방법으로 사용됩니다. 이 절차는 자동화된 Non-Gyn 염색 절차와 유사한 품질의 염색을 제공합니다. 절차는 표 2에 설명되어 있습니다.

표 1: Non-Gyn 염색 단계.

95% 에탄올	5 분
H2O	10초
헤마톡실린	15 sec - 3 min
증류된 H2O	5 분
95% 에탄올	30초
이어레이65	2 - 5 분
95% 에탄올	30초
95% 에탄올	30초
100% 에탄올	30초
100% 에탄올	30초
크실렌	30초
크실렌	5 분

표 2: 수동 빠른 PAP 염색 단계.

분 .

95% 에탄올	10 딥
H2O	10 딥
헤마톡실린	10초-1
증류된 H2O	10 딥
95% 에탄올	10 딥
이어레이65	1 - 3 분
95% 에탄올	10 딥
100% 에탄올	10 딥
크실렌	맑아질 때까지 담그십시오

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
파파니콜라우 스테인, EA 65	시그마 알드리치	HT40432
95% 에탄올	시그마 알드리치	652261
100% 에탄올	시그마 알드리치	493538
크실렌	시그마 알드리치	214736
헤마톡실린	시그마 알드리치	H9627