이중 염색 방법: 루테늄 레드와 락토페놀 코튼 블루를 사용하여 식물-곰팡이 상호 작용을 시각화하는 기술

초록

출처: Marques, J. P. R. 및 Nuevo, L. G. 식물-곰팡이 상호 작용에서 펙틴을 감지하는 이중 염색 방법. J. Vis. 특급. (2022).

이 동영상은 루테늄 레드와 락토페놀 코튼 블루를 사용하여 커피 녹병 식물에서 식물과 곰팡이가 상호 작용하는 동안 펙틴과 키틴을 시각화하는 이중 염색 방법을 보여줍니다. 이 절차는 곰팡이 감염 중 식물 방어 메커니즘을 이해하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. 이중 염색 공정

1. 커피 녹병에 감염된 Coffee arabica cv. Catuaí의 초박형 수지 내장 잎 부분으로 시작합니다. 락토페놀(물 중 글리세롤 40%, 페놀 20%, 젖산 20%)에 5% 코튼 블루 2mL를 묻혀 섹션을 덮고 45°C의 핫 플레이트에서 5분 동안 가열합니다(그림 1A).
2. 증류수를 채운 비커에서 슬라이드를 세 번 세척하여 여분의 염료를 제거합니다(그림 1B-D).
3. 2mL의 0.01% 루테늄 레드로 1분 동안 염색합니다(그림 1E).
4. 증류수를 채운 비커에서 슬라이드를 세 번 세척하여 여분의 염료를 제거합니다(그림 1F,G).
5. 광학 현미경 분석을 수행하기 위해 섹션 위에 증류수 한 방울을 떨어뜨리고 섹션을 24mm x 60mm 커버슬립으로 덮습니다.

결과

그림 1: 이중 염색 프로토콜의 개별 단계에 대한 세부 정보. (A) 면을 입힌 블루 락토페놀 방울로 섹션을 덮고 45°C에서 핫 플레이트의 슬라이드를 가열합니다. (B-C) 증류수로 세척하여 여분의 염료를 제거합니다. (D) 세탁 후 유리가 미끄러지는 부분(화살표로 표시). (E) 루테늄 레드 방울로 섹션을 덮습니다. (F-G) 증류수로 세척하여 여분의 염료를 제거하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
핫 플레이트	두베서	SSCD25X30-110V	얼룩
코튼 블루 락토페놀	메타퀴미카	70솔시그024629	얼룩
현미경 검사 법	자이스	#의 490040-0030-000	이미지 캡처
플라스틱 몰딩 컵 트레이	EMS (엠에스)	10176-30	얼룩
루테늄 레드	랩하우스	#006004	얼룩
소프트웨어: Axion Vision	자이스	#410130-0909-000	이미지 캡처

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