Picrosirius Red Polarization Staining: 명시야 현미경을 사용하여 심장 조직 절편에서 섬유증을 감지하는 기술

초록

출처: Ku, H. C. et al., 쥐의 복부 대동맥 수축을 통한 심장 리모델링 모델. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 섬유화 조직 절편에서 과도한 콜라겐 침착을 감지하기 위해 섬유화 조직의 피크로시리우스 레드 염색을 설명합니다. 염색 기법은 결합 조직 질환에서 콜라겐 발현을 평가하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 조직 섬유증 정량화

1. 파라포름알데히드로 고정된 심장 조직을 조직 절편 장치에 놓고 2mm 두께의 절편을 자릅니다. 조직 절편을 임베딩 카세트에 놓습니다. 일련의 등급별 알코올 수조(각각 50시간 동안 75%, 95%, 100%)를 통해 조직을 탈수합니다.
2. 1시간 동안 자일렌으로 조직을 침투시키고 마지막으로 1시간 동안 왁스에 침투시킵니다. 침투된 조직을 임베딩 카세트에 넣고 파라핀 왁스를 삽입하십시오. 파라핀 블록에 포함된 조직을 마이크로토밍까지 실온에서 보관하십시오.
3. 내장된 조직을 4μm 두께의 절편으로 자릅니다. 섹션을 45ºC 수조에 놓습니다. 유리 슬라이드를 비스듬히 수조에 담그고 파라핀 섹션 가장자리에 서서히 접근하여 슬라이드에 부분적으로 부착할 수 있도록 합니다.
4. 슬라이드를 욕조 안팎으로 움직여 티슈 섹션 아래의 잠재적인 공기 주머니를 제거하고 더 잘 부착할 수 있습니다. 슬라이드를 37ºC에서 1시간 동안 건조시키고 조직학적 염색을 위해 실온에 보관하십시오.
5. 슬라이드를 탱크에 넣으십시오. 슬라이드....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
파라포름알데히드	시그마 알드리치	441244
피로시리우스 레드 용액	아브캠	AB150681
이미지퀀트	분자 역학