리그닌 시각화를 위한 Wiesner 염색: 애기장대 탈리아나의 줄기에 존재하는 리그닌 침전물을 염색하는 기술

초록

출처: Pradhan Mitra, P. et al., Arabidopsis thaliana 2차 세포벽 요소의 조직화학적 염색. J. Vis. 특급 (2014).

이 비디오에서는 특수 식물 세포에 존재하는 리그닌을 염색하기 위한 Wiesner 염색 기술에 대해 설명합니다. 이 염색 기술은 애기장대 탈리아나 줄기에서 리그화된 세포벽을 시각화하는 데 도움이 되며 다양한 유형의 세포 세포벽에서 리그니화를 정량화하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. 스템 임베딩

1. 물에 7% 아가로스 용액을 만듭니다(증류수 100ml에 전기영동 등급 아가로스 7g). 아가로스를 20분 동안 고압증기멸균하거나 가장 낮은 강도(예: 1,250와트 전자레인지의 10% 강도)에서 20분 동안 전자레인지에 돌려 아가로스를 용해시킵니다.
2. 플라스틱 바이알을 사용하여 줄기를 삽입하기 위한 수제 금형을 준비합니다.
   1. 면도날을 사용하여 2ml 나사 캡 미세 원심 분리기 튜브(파트 A)의 원뿔형 바닥을 잘라냅니다. 주사기 바늘을 사용하여 삽입할 줄기의 직경보다 약간 큰 튜브 캡에 구멍을 뚫습니다. 그런 다음 0.6ml 마이크로 원심분리기 튜브(파트 B)의 바닥에서 0.5cm 떨어진 곳을 자릅니다.
   2. 0.6ml 마이크로 원심분리기 튜브의 절단된 0.5cm 부분을 미리 절단된 2ml 마이크로 원심분리기 튜브에 추가합니다. 파라필름을 사용하여 두 부분을 밀봉합니다(그림 1).
      메모: 튜브의 바닥은 아가로스가 응고된 후 포함된 샘플을 쉽게 제거할 수 있도록 절단됩니다. 캡의 구멍은 줄기가 아가로스에 박혀 있을 때 줄기를 안정적으로 유지하는 데 도움이 됩니다. 곰팡이는 아가로스를 고정하고 매립할 때 줄기를 똑바로 ....

결과

그림 1. 줄기를 삽입하기 위한 수제 금형.왼쪽에; 2ml 나사 캡 미세 원심분리기 튜브(파트 A)의 상단과 0.6ml 마이크로 원심분리기 튜브(파트 B)의 하단. 오른쪽에; 두 부분을 보유하고있는 파라 필름; A와 B를 만들어 최종 금형을 형성합니다.

그림 2. A. thaliana 줄기 단면의 Phloroglucinol-HCl 염색. 야생형 A. thaliana 줄기 절편의 Phloroglucinol-HCl 염색(분홍색 또는 자홍색)은 근막간 섬유 및 물관부 세포(A-E)의 벽에서 정상적인 리그닌 침착을 보여줍니.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아가로스	엠디(EMD)	MERC2125	CAS 번호 : 9012-36-6
플로로글루시놀	시그마	피 3502	1,3,5-트리하이드록시벤젠 [CAS 번호: 108-73-6]
염산	엠디(EMD)	HX0603-75	CAS 번호: 7647-01-0
에탄올 190 프루프	(주)코프텍	V1401	CAS 번호 : 64-17-5
비브라톰	라이카	라이카 진동 블레이드 마이크로톰 VT1000S	http://www.leicabiosystems.com/ 제품/단면/진동블레이드-마이크로톰/상세/제품/라이카-VT1000-S/
면도기	미국 안전 면도기 회사	항목 # 60-0139-0000	스테인레스 스틸 더블 에지 블레이드 (Personna Super)
스크류 캡 마이크로 원심분리기 튜브(2ml)	폭스바겐	16466-044
마이크로 원심분리기 튜브(0.6ml)	Axygen 사이언티픽	MCT-060-C
티슈 접착제	테드 펠라 Inc	10033	4 °C 또는 20 °C에서 3개월 이상 보관
기계식 셔터가 없는 CCD 칩이 있는 카메라	하마마쓰	C4742-95
카메라 소프트웨어	분자 장치	MetaMorph 버전 7.7.0.0
분석 상상	어도비	포토샵 CS4
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