콩고 레드 염색: 식물 줄기 절편에서 셀룰로오스 침전물을 시각화하는 기술

초록

출처: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Arabidopsis thaliana 2차 세포벽 요소의 조직화학적 염색. J. Vis. 특급. (2014).

이 비디오에서는 애기장대 탈리아나 줄기 절편에서 셀룰로오스 침전물을 시각화하는 콩고 적색 염색 방법을 보여줍니다.

프로토콜

1. 콩고 레드 스테인링

1. 0.5g 콩고 레드 0.5g을 증류수 100ml에 녹여 0.5% 콩고 레드 용액을 준비합니다.
2. 스템 절편을 2.0ml 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 튜브에 0.5% 콩고 레드 용액 1ml를 추가합니다. 섹션을 방해하지 않고 0.5% 콩고 레드 용액을 위아래로 부드럽게 피펫팅합니다.
   알림: 섹션이 손상될 수 있으므로 섹션을 피펫 팁에 피펫으로 넣지 않도록 주의하십시오.
3. 실온에서 10분 동안 배양하고 피펫팅을 반복합니다. 그 후 실온에서 3분 더 배양합니다.
4. 1ml 피펫을 사용하여 700μl의 0.5% 콩고 레드 용액을 추출합니다. 증류수 700μl를 넣어 콩고 레드 용액을 헹굽니다. 세척 용액이 깨끗해질 때까지 3-4회 세척을 반복합니다.
5. 팁이 절단된 1ml 피펫을 사용하여 섹션을 손상 없이 쉽게 피펫으로 빼낼 수 있습니다. 절편을 팁과 현미경 슬라이드에 부드럽게 피펫으로 넣고 커버슬립으로 덮습니다. 관찰amp대역통과가 560/40.
   인 필터를 사용하여 청색광 여기 상태에서 현미경 슬라이드의 샘플을 관찰합니다. 참고: 물은 10-30분 안에 콩고 레드를 씻어낼 수 있으므로 현미경 분석 전에 섹션을 물에 오래 보관하지 마십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
콩고 레드	시그마	C6277	디 소듐 3,3'-[[1,1'- 비 페닐] -4,4'- 디일 비스 (아조)] 비스 (4- 아미노 나프탈렌 1- 설포 네이트) [CAS 번호 573-58-0]
마이크로 원심분리기 튜브(0.6ml)	Axygen 사이언티픽	MCT-060-C
기계식 셔터가 없는 CCD 칩이 있는 카메라	하마마쓰	C4742-95
고속 컬러 카메라	Q이미징	마이크로퍼블리셔 5.0 RTV
카메라 소프트웨어	분자 장치	MetaMorph 버전 7.7.0.0
분석 상상	어도비	포토샵 CS4
마이크로 커버 안경, 사각, No. 1	폭스바겐	제48366-067	22 x 22mm(7/8 x 7/8") 커버 유리는 부식에 강하고 균일하게 두껍고 평평합니다. 1 번 두께는 0.13-0.17 mm입니다.
불투명 마이크로 슬라이드, 1mm	폭스바겐	48312-003	75 x 25 밀리미터 - 1 밀리미터
TX2 필터 큐브	라이카	11513851/11513885	560/40 대역 통과를 사용한 콩고 적색 분석에 사용되는 필터입니다.