Bathophenanthroline Sulfonate-based colorimetric assay: 마우스 간 조직에서 비헴철의 정량화를 위한 간단하고 빠른 방법

초록

출처: Duarte, T. L., Neves, J. V. Bathophenanthroline 기반 비색 분석을 사용한 조직 비헴철 함량 측정. J. Vis. 특급 (2022)

이 비디오에서는 마우스 간 조직에서 비헴철 함량을 측정하는 비색 측정 기반 방법을 설명합니다. Bathophenanthroline sulfonate는 환원제의 존재 하에서 발색 기질로 사용되며, 이는 철을 chelatable 철 철로 변환합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토

되었습니다.

1. 솔루션 준비

참고: 모든 시약과 용액을 철분이 없는 유리 제품 또는 일회용 플라스틱 제품으로 취급하고 준비하십시오. 철 오염의 위험이 있으므로 금속 실험실 재료(예: 스테인리스 스틸 주걱)가 시약이나 용액과 접촉하지 않도록 하십시오. 재사용 가능한 유리 제품에 철분이 없는지 확인하십시오. 적절한 실험실 세제로 재료를 30-60 분 동안 씻고 탈 이온수로 헹구고 탈 이온수로 37 : 1로 희석 한 3 % 질산 용액에 밤새 담근 다음 탈 이온수로 다시 헹구고 건조시킵니다.

1. 산 혼합물 : 유리 병에 37 % 염산 82.2mL에 트리클로로 아세트산 10g을 넣고 완전히 용해 한 다음 탈 이온수로 최종 부피를 100mL로 조정하십시오. 사용 전에 흔들어 주십시오. 또는 조직 소화를 위해 37% 염산만 사용하십시오.
   메모: 이 용액은 짙은 갈색 유리 시약 병에 보관할 때 최소 2 개월 동안 안정적입니다 .
   주의: 염산....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
96 웰 UV 투명 플레이트	사르슈테트	82.1581.001
분석 저울	컨	ABJ 220-4M
무수 아세트산 나트륨	머 크	106268
바토페난트롤린 설포네이트(4,7-디페닐-1,10-페난트롤린 디설폰산)	시그마-알드리치	나1375
C57BL/6 마우스(Mus musculus)	찰스 리버 연구소
카르보닐 철 분말, ≥99.5%	시그마-알드리치	44890
폴리메틸 메타크릴레이트(PMMA)의 일회용 큐벳	폭스바겐	634-0678피
이중 증류수, 멸균수	B. 브라운	0082479E
형광 마이크로플레이트 리더	BioTek 기기	FLx800
염산, 37%	시그마-알드리치	258148
전자레인지 소화 오븐과 흰색 테프론 컵	증권 시세	MDS-2000
질산	피셔 사이언티픽	15687290
오븐	바인더	ED115
설치류 차우	할란 연구소	2014년대	철분 175mg/kg을 함유한 Teklad Global 14% 단백질 설치류 유지 다이어트
농어(Dicentrarchus labrax)	손리오난사
농어 피드	스크레팅	L-2 알터나 1P
단일 빔 UV-Vis 분광 광도계	시마즈	UV 미니 1240
티오글리콜산	머 크	100700
트리클로로아세트산	머 크	100807

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