Small Molecule Nematicides 스크리닝 분석: Ditylenchus dipsaci 에 대한 잠재적 선충제를 스크리닝하는 중간 처리량 방법

Abstract

출처: Cammalleri, S. R., et al. 식물 기생 선충 Ditylenchus dipsaci의 배양 및 스크리닝. J. Vis. 특급. (2022).

이 비디오에서는 선충에 대한 저분자 선충제의 효능을 확인하기 위한 스크리닝 분석을 시연합니다. 선충제는 노출 후 샘플에서 이동성 선충의 수를 감소시키는 경우 효과적인 것으로 간주됩니다.

Protocol

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토

되었습니다.

1. 체외 소분자 스크린

1. 아래 단계에 따라 분석 플레이트를 준비합니다.
   1. 오토클레이브 증류수를 멸균 트러프에 붓고 멀티채널 피펫을 사용하여 트러프에서 40μL의 증류수를 평평한 바닥 96웰 플레이트의 각 웰로 분배합니다.
2. 고정 도구를 준비하고 화학 물질을 추가합니다.
   1. 실험실 벤치의 분젠 버너 불꽃 근처에 피너 트레이(재료 표 참조)를 설정합니다. 핀 세척 용액 25mL, 50% DMSO 35mL(물 중), 증류수 45mL, 70% EtOH 55mL 및 95% EtOH 65mL를 연속적인 피너 트레이에 추가합니다. 각 트레이 앞에 블로팅 페이퍼를 한 장씩 놓습니다.
   2. 세척액에 있는 핀을 펌핑하고 용액에서 핀을 위아래로 세 번(3회) 움직여 고정 도구를 청소합니다. 이 프로토콜에서 '3x' 및 '10x'는 솔루션에서 피너를 각각 3회 또는 10회 위아래로 움직이는 것으로 정의됩니다. 압지의 핀을 닦아냅니다. 이 절차를 한 번 더 반복합니다.....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
50mL 비커	파이렉스	CLS100050
96웰 플레이트	사르슈테트	83.3924
알루미늄 호일	알칸 플러스
해부 범위	라이카	라이카 MZ75
디엠소	시그마-알드리치	472301-500ML
유리 슬라이드	마그나	60-1200
보푸라기가 없는 블로팅 페이퍼	V&P 사이언티픽	부통령 522-100
저유지력 피펫 팁(200uL)	랩포스	1159분 44
멀티채널 피펫	Eppendorf research plus	3125000036
나오	시그마-알드리치	S8045-500G
파라필름	베미스	미세먼지-996
핀 세척 용액	V&P 사이언티픽	VP110A
피너	V&P 사이언티픽	VP381N은
피너 린스 트레이	V&P 사이언티픽	부사장 421
Reagent reservoir with lid for multichannel pipettes (멀티채널 피펫용 뚜껑이 있는 시약 저장장치)	시그마-알드리치	BR703459
쉐이킹 인큐베이터	뉴브런즈윅 사이언티픽	나26