Differential Nuclear Staining Assay: Propidium Iodide 및 Hoechst Double Staining에 의한 미토칸 세포 독성을 측정하기 위한 분석

초록

출처: Pei, J. et al., 미토칸 세포 독성의 정확한 측정을 위한 자동 차등 핵 염색 분석. J. Vis. 특급 (2020)

이 동영상은 약물에 민감한 암세포와 건강한 변이에 대한 미토칸의 세포독성 효과를 검출하는 핵 염색 방법을 보여줍니다. 프로피듐 요오드화물 및 Hoechst 염료와 같은 DNA 결합 염료를 사용한 이중 염색은 죽은 세포와 살아있는 세포를 명확하게 구분하여 약물의 세포 독성을 평가하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. 세포 독성 분석 : 설정

1. 적절한 배지(무혈청 또는 1, 2.5 또는 5% FBS RPMI-1640)에서 원하는 농도의 관심 화합물 용액을 준비합니다.
   1. 단일 화합물의 세포 독성을 측정하려면(예: 효과적인 용량을 결정하기 위해) 최종 농도의 2배에서 화합물을 준비합니다.
   2. 화합물 조합의 세포 독성을 측정하려면 최종 농도의 4배에서 화합물을 준비합니다.
   3. 동일한 양의 용매를 적절한 매체와 혼합하여 용매 전용 대조군을 준비합니다. 예를 들어, DMSO와 메탄올에 용해된 화합물을 테스트하는 경우 각 용매에 대해 용매 전용 제어를 수행합니다.
2. 배양 접시 또는 플라스크에서 세포를 15mL 코니컬 튜브로 수집합니다.
3. 10μL의 세포 현탁액을 마이크로 원심분리 튜브로 옮기고 10μL 0.4% 트리판 블루로 염색합니다. 혈구계를 사용하여 각 세포 공급원에 대해 생존 가능한 세포와 생존 불가능한 세포를 계수합니다.
4. 펠렛 세포를 200g에서 5분 동안 흡입 또는 디캔트 상층액.
5. 세포 밀도 3*10⁵ cells.
   의 세포 밀도에서 분석에 적합한 배지(무혈청 또는 1, 2.5, 5% FBS R....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2-데옥시-D-글루코스/2-DG	켐-임펙스	50-519-067
3-브로모-피루브산	알파 에자르	1113-59-3
96웰 플레이트	Greiner 바이오 원	655090	검은색 또는 투명한 평평한 바닥의 96웰 플레이트
Countess II 자동 세포 계수기	써모 피셔
Cytation 5 Cell Imaging 다중 모드 리더	(주)바이오텍
회스트: 33342	써모 피셔	62249	20 mM 용액; 최종 농도 1:1,000
HyClone 소 태아 세럼	GE 헬스케어	#25-514
m-클로로페닐하이드라존/CCCP	시그마 알드리치	C2759
PBS 정제	써모 피셔	BP2944100	1정 + 멸균수 200mL = PBS 용액 1개
페니실린-스트렙토마이신-글루타민 (100X)	지브코	10378016
프로피듐 요오드화물	써모 피셔	50-596-072	건조 분말; PBS에 1 mg/mL 재고, 최종 농도 5 μg/mL (백혈병 세포), 1 μg/mL (일반 PBMC)
로테논	아크 팜	AK115691
RPMI-1640 배지, L-글루타민 및 중탄산나트륨, 액체, 멸균 여과, 세포 배양에 적합	시그마 알드리치	R8758-500ML
트리판 블루 스테인(0.4%)	지브코	제15250-061
세포주
K562	증권 시세	CCL-243	CML 세포주
몰름-13	증권 시세		AML 세포주
몰트-4	증권 시세	CRL-1582	ALL 세포주
OCI-AML2	증권 시세		AML 세포주

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