인간화 매개체 효소 방출 분석법: 체외에서 호염질 탈과립 반응을 모니터링하여 테스트 항원의 알레르기 가능성을 스크리닝하는 면역화학적 방법

Abstract

Loading...

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 비디오에서는 호염질 탈과립화를 유도하기 위해 항원의 알레르기 가능성을 평가하는 시험관 내 방법에 대해 설명합니다. β-hexosamindase는 화학적 매개체 방출의 지표로 사용되며 β-hexosamiminase의 효소 활성은 형광 기질을 사용하여 측정합니다.

Loading...

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 기관, 국가 및 국제 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. huRBL 세포의 수동적 감작

사전 배양된 Ag8/혈청 현탁액을 250 x g에서 5분 동안 원심분리합니다.
원심분리된 Ag8/혈청 현탁액 50μL를 Ag8 세포 펠릿을 방해하지 않고 huRBL 세포가 포함된 각 웰로 이동합니다.
1. 무항원 대조군(no antigen control)을 포함하는데, 이는 민감하지만 자극되지 않은 세포(항원을 추가하지 않음)로, 바닥 신호 고원/배경에 대한 표시 역할을 합니다. 백그라운드 및 최대 용해 제어 웰은 혈청으로 감작할 필요가 없습니다. 대신 50μL의 huRBL 배지를 추가하여 웰을 제어합니다.
뚜껑으로 플레이트를 덮고 37 ° C 및 5 % -7 % CO₂에서 밤새 배양합니다.

2. 항원 자극 탈과립 및 매개체 방출

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Loading...

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

선언된 이해 상충이 없습니다.

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number
4-메틸룸벨리페릴 N-아세틸-β-D-글루코사미나이드	시그마	M2133
huRBL 세포용 96웰 플레이트(Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Deltatreated, flat-bottom microplate)	써모피셔 사이언티픽	167008
기질 용액 및 세포 상층액용 96웰 플레이트(Greiner BioOne 비처리 96웰 마이크로플레이트)	피셔 사이언티픽	655101
소 혈청 알부민(BSA)	시그마	10735078001
구연산	애플리켐	131018
글리신	애플리켐	A3707 (영어
염화나트륨 (NaCl)	애플리켐	A2942 (영어
탄산수소나트륨(NaHCO₃)	애플리켐	131638
트리톤 X-100	시그마	엑스100
티로드의 소금	시그마	T2145

) )

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article