방법 논문

Bioreporter Assay: SARS-CoV-2 항체를 검출하기 위해 생물발광 리포터 시스템을 사용하는 민감한 기술

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Rezaei, R. et al., HiBiT 기반 Bioreporter를 사용한 SARS-CoV-2 수용체 결합 도메인 항체 검출. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오에서는 SARS-CoV-2 중화 항체를 검출하기 위한 HiBit-RBD 바이오리포터 시스템 기반 분석을 보여줍니다. 이 시스템은 RBD 도메인에 융합된 HiBiT를 포함하는 생물 발광 리포터 시스템을 사용하여 바이러스 RBD 도메인을 표적으로 합니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 빠르고 민감한 분석법으로 anti-RBD 항체 검출

  1. HiBiT-RBD 항체 검출 분석
    1. HiBiT-RBD bioreporter를 준비합니다.
      메모: 다음 분석에는 단백질의 성숙한 당화(glycosylated) 버전을 수집하고 포함하는 것이 더 간단하므로 상등액을 사용하는 것이 좋습니다. 또한, 용해물에는 HiBiT-RBD-항체 상호 작용을 방해할 수 있는 몇 가지 다른 단백질이 있습니다.
    2. 1.5mL 마이크로튜브에 50μL의 HiBiT-RBD 함유 상등액과 1μg의 상용 SARS-CoV-2-RBD 항체를 결합합니다. 용액에 20μL의 면역글로불린 결합 단백질(단백질 G)을 추가합니다. PBS.
      를 추가하여 총 부피를 300μL로 높입니다. 메모: 혼합물의 총 부피는 150μL로 줄일 수 있습니다. 더 낮은 총 부피는 항체가 생물 리포터와 부적절하게 혼합될 수 있으므로 권장되지 않습니다.
    3. 튜브 셰이커 또는 로테이터에서 튜브를 30분 동안 배양하고 12,000 x g에서 30초 동안 원심분리기를 만들고 상층액을 버리고 PBS로 세척합니다. 이 과정을 세 번 반복하여 유리 HiBiT-RBD를 제거합니다. 50μL의 PBS에 재현탁하고 96웰 플레이트로 옮깁니다.
    4. 50μL의 1x LgBiT를 넣고 5분 동안 기다립니다. 그런 다음 50μL의 1x NanoLuc 기판을 추가합니다. 즉시 광도계로 발광 신호를 읽습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Bio-Plex 휴대용 마그네틱 세척기바이오 라드171020100장치
Dual-Glo luciferase 분석 시스템프로메가E2940100 mL 키트
엘그비트프로메가N3030분석 키트
Pierce Protein G 마그네틱 비드써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific88848시험
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) 스파이크 중화 항체, 마우스 Mab중국생물학40592-MM57시험
Synergy Mx 마이크로플레이트 리더(주)바이오텍96웰 플레이트 리더 광도계
)

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

HiBiT RBDRBDProtein GLgBiT

관련 논문