세포 내 기생충 생식을 정량화하기 위한 Luciferase-based growth assay

초록

출처: Key, M., et al., 루시페라제 기반 성장 분석을 사용하여 세포 내 톡소플라스마 Gondii 성장에 대한 화학적 억제제 효율 측정. J. Vis. 특급. (2020년)

이 비디오에서는 세포 내 병원균인 Toxoplasma gondii의 성장을 정량화하기 위한 루시페라아제 분석을 시연합니다. 숙주 세포를 감염시킨 후 루시페라아제 효소를 발현하는 톡소플라스마(Toxoplasma) 균주를 활용하여 감염된 세포 배양에서 루시페라아제 활성을 감지하여 기생충의 성공적인 번식을 확인합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 루시페라아제 기반 톡소플라스마 성장 분석

1. 기생충 접종 1주일 전에 인간 포피 섬유아세포(HFF)를 파종하여 숙주 세포가 완전히 융합되도록 합니다. 평가 기간 동안 기생충이 세포 내에 남아 있는지 확인하기 위해 투명 플레이트에서 모의 분석을 수행합니다.
   메모: 여기에서 분석은 96웰 마이크로플레이트에서 수행됩니다. 실험적 필요에 따라 최대 384웰 또는 1536웰 마이크로플레이트까지 확장할 수 있습니다.
2. 완전히 용해된 기생충 ~0.3-0.4mL를 T25 플라스크에 옮겨 사용 2일 전에 톡소플라스마 기생충을 융합 HFF에 전달합니다. 감염된 숙주 세포를 37°C에서 5% CO₂로 2일 동안 배양합니다.
3. 갓 용해된 기생충 5mL를 21G 안전 바늘로 5회 주사기하여 세포 내 기생충을 방출한 다음 3μm 필터를 통과시켜 숙주 세포 파편을 제거합니다. 페놀 레드가 없는 D10 배지 7mL를 사용하여 플라스크에서 잔류 기생충을 헹구고 필터를 다시 통과시킵니다.
4. 기생충을 1....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Biotek Synergy H1 하이브리드 멀티모드 마이크로플레이트 리더	BioTek 제품
Coelenterazine h	프롤룸	재질 보기 301-10 hCTZ
소프트웨어
GraphPad Prism 소프트웨어(8번째 버전)