어류 배아에서 PM2.5 매개 DNA 손상을 검출하기 위한 면역형광 분석

초록

출처: Huang, Y., et al. 제브라피시 배아 심장에서 PM_2.5 유도 DNA 손상을 감지하기 위해 면역형광을 사용합니다. J. Vis. 특급 (2021).

이 동영상은 DNA 손상과 이중 가닥 DNA 절단을 각각 나타내는 8-OHdG 및 γH2AX의 수치를 측정하여 제브라피시 배아의 심장에서 PM_2.5로 인한 산화 손상을 감지하는 고감도 면역형광 기반 분석을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. PM_2.5 샘플링 및 유기 화합물 추출

참고: PM_2.5는 앞서 설명한 대로 2015년 8월 1일부터 7일까지 중국 쑤저우의 한 도시 지역에서 수집되었습니다.

1. 47mm 석영 멤브레인 필터를 500°C 머플 퍼니스에서 2시간 동안 굽고 유기 성분을 제거합니다.
2. 24시간 동안 중단 없는 샘플링을 위해 PM_2.5 샘플러에 필터를 넣습니다.
3. 필터를 제거하고 실온에서 24시간 동안 건조합니다.
4. 분석 저울로 필터를 정량화합니다.
5. 디클로로메탄을 용매로 사용하여 Soxhlet 추출을 통해 필터에서 유기 성분을 추출합니다.
6. 60°C 수조와 질소 흐름에서 회전 증발로 EOM을 건조합니다. DMSO에 EOM을 용해하고 -20 °C에서 보관하십시오.

2. 제브라피시 배아 채취 및 치료

1. 제브라피쉬를 14시간 광주기 주기와 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
8-OHdG 항체	산타크루즈 생명공학, 미국	사우스캐롤라이나-66036	1차 항체
분석 저울	Sartorius, 중국	BSA124S
증권 시세	Solarbio, 베이징, 중국	SW3015	차단용
다피	Abcam, 미국	AB104139	핵 counterstain을 위해.
디엠소	Solarbio, 베이징, 중국	D8371
형광 현미경	올림푸스, 일본	익스73	형광 신호 이미징용
염소 안티 토끼 IgG Cy3	칼즈배드, 미국	CW0159	2차 항체
염소 안티 토끼 IgG FITC	칼즈배드, 미국	RS0003	2차 항체
N-아세틸-L-시스테인(NAC)	Adamas-Beta, 중국 상하이	616-91-1
오비탈 쉐이커	QILINBEIER, 중국	TS-1
파라포름알데히드	시그마, 중국	P6148	고정을 위해 4%의 파라포름알데히드를 만듭니다.
인산염 완충 식염수	HyClone, 미국	SH30256.01	세탁을 위해 PBS에 0.1% 트윈을 준비합니다.
PM2.5 샘플러	TianHong, 우한, 중국	토륨-150C	24시간 중단 없는 PM2.5 샘플링용.
재순환 양식 시스템	HaiSheng, 상하이, 중국		제브라 피쉬는 그 안에서 유지되었습니다.
Soxhlet 추출기	ZhengQiao, 상하이, 중국	BSXT-02	유기 성분 추출용.
실체현미경	니콘, 캐나다	SMZ645	제브라피시 배아의 심장 박리용.
트리카인 메탄설포네이트(MS222)	시그마, 중국	E10521	제브라피시 배아를 마취하기 위해
트윈 20	시그마, 중국	P1379
γH2AX 항체	Abcam, 미국	AB26350	1차 항체

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