간질 활동을 기록하기 위한 뇌파검사 기반 기록 기술

초록

출처: Carvalho, M. et al., Rhinal Cortex-Hippocampus Organotypic Slice Cultures의 간질 형성 모델. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오는 전기생리학 또는 EEG 설정을 사용하여 rhinal cortex-hippocampus organotypic slice의 간질 활성을 생체 외 기록하는 기술을 설명합니다. 이는 간질 형성의 역학과 진행을 연구하고 간질을 치료하기 위한 잠재적인 치료 표적을 선별하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. rhinal cortex-hippocampus slices의 준비

참고: rhinal cortex-hippocampus slices의 준비는 P6-7 Sprague-Dawley 쥐를 사용합니다.

1. 배양 설정 및 배지 준비
   1. 배양 전날에 필요한 배지를 준비하고 4°C에 놓습니다.
   2. 해부 매체 준비: Gey's Balanced Salt Solution(GBSS)에서 25mM 포도당.
   3. 배양 배지 준비: 50% Opti-MEM, 25% HBSS, 25% 말 혈청(HS), 25mM 포도당, 30μg/mL 겐타마이신.
   4. 유지 관리 매체 준비: Neurobasal-A(NBA), 2% B27, 1mM L-글루타민, 30μg/mL 겐타마이신, HS(15%, 10%, 5% 및 0%).
2. 두뇌 수확
   1. 배양을 시작하기 직전에 P1000 피펫을 사용하여 6웰 플레이트의 각 웰에 1.1mL의 배양 배지를 추가하고 37°C....

결과

그림 1: rhinal cortex-hippocampus organotypic slice 준비를 위한 세부 절차.(A) 머리에서 뇌를 제거하고 등쪽 표면이 위를 향하도록 얼음처럼 차가운 GBSS에 놓습니다. (B) 집게를 소뇌에 삽입합니다. 정중선을 통해 뇌를 열고 해마 위의 과도한 조직을 제거합니다. (C) 화살표로 표시된 대로 해마 아래를 자른 주걱으로. (D) 양쪽 해마를 위로 향하게 놓고 서로 평행하게 여과지에 놓고 조직 초퍼에서 350μm 슬라이스를 자릅니다. (E) 얇게 썬 해마를 얼음처럼 차가운 GBSS에 넣습니다. (F) 끝이.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
인공 뇌척수액(aCSF)			만든
B-27™ 보충제 (50X), 무혈청	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	제17504-044
메스 손잡이용 블레이드	정밀 과학 도구	10011-00
소 혈청 알부민(BSA)	NZY테크	MB04602	5% BSA는 1차 항체를 희석하는 데 사용됩니다. 10mL PBS에 0.5g BSA를 첨가합니다.
뇌/조직 슬라이스 챔버 시스템	워너 인스트루먼트
세포 배양 인서트, 30mm, 친수성 PTFE	밀리포어 SAS	PICM03050
기존 인큐베이터	Thermo Scientific 헤레우스	BB15, 기능 라인	37°C 및 5% CO2로 설정
Gey의 균형 잡힌 소금 용액 (GBSS)	생물 산업	01-919-1ᄀ
유리 전극	과학 제품	GB150F-10	수제 라운드 팁
인터페이스 챔버	워너 인스트루먼트	BSC-HT 하스 탑
아이리스 스패튤라 커브드	정밀 과학 도구	10092-12
렌즈 청소지	티펜
L-글루타민 용액 200mM(Q)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	제25030-024
티슈 헬기	미클 연구소 엔지니어링 CO., LTD.	선교사 훈련원/2	350μm로 설정

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