방법 논문

웜에서 PolyQ-Mediated Neurotoxicity에 대한 테스트 화합물의 효과를 연구하기 위한 분석

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Wang, Q. et al., 폴리글루타민 매개 신경독성에 대한 생체 활성 화합물을 발견하기 위한 모델 시스템으로서의 Caenorhabditis elegans. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오에서는 polyQ-매개 신경독성으로 인한 Caenorhabditis elegans의 신경세포 생존에 대한 테스트 화합물 astragalan의 신경 보호 효과를 평가하는 방법을 설명합니다. 이 분석은 ASH 뉴런에서 GFP에 융합된 비정상적으로 확장된 polyQ 반복을 발현하는 Caenorhabditis elegans를 사용하여 테스트 화합물 처리 후 뉴런 생존을 측정합니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. PolyQ 매개 신경독성 분석

  1. 시험 샘플을 사용한 C. elegans의 처리
    1. polyQ 신경독성 분석을 위해 선충을 준비하려면 HA759의 300-500 동기화된 L1 유충을 OP50(0.7-0.8의 OD570) 및 5mg/mL의 아스트라갈란을 포함하는 500μL의 S 배지가 있는 48웰 플레이트의 각 웰로 옮깁니다. 일반적으로 각 처리에 대해 3개의 복제 웰
      2. 을 사용합니다.
    2. 파라필름으로 플레이트를 밀봉하고 15°C 및 120rpm에서 3일 동안 배양합니다.
    3. 원심분리로 선충을 수집하고 M9 완충액으로 3-5회 세척합니다. 신경 세포 생존 및 회피 분석에 사용하기 위해 M9 완충액에 선충을 재현탁합니다.
  2. 아가로스 패드의 준비
    1. M9 완충액 100mL(2%, w/v)에 아가로스 2g을 넣고 아가로스 용액을 전자레인지에서 거의 끓을 때까지 가열합니다.
    2. 2mm 두께의 유리판 두 개 조각 사이에 놓인 1mm 두께의 현미경 유리 슬라이드의 중앙에 용융된 아가로스 0.5mL를 분배합니다. 다른 슬라이드로 세로로 덮습니다. 아가로스가 식고 굳어지면 상단 슬라이드를 부드럽게 제거합니다.
  3. ASH 신경 세포 생존 분석
    1. 아가로스 패드에 20mM 아지드화나트륨 한 방울을 떨어뜨립니다. 15-20 개의 HA759 선충을 낙하물로 옮겨 움직이지 못하게합니다.
    2. 선충 위에 커버슬립을 부드럽게 놓습니다. 슬라이드를 디지털 카메라가 장착된 형광 현미경 아래에 보관하십시오. 40x 대물렌즈와 FITC 필터를 선택하여 선충의 머리 영역에서 GFP 양성 ASH 뉴런을 검출합니다.
    3. 각 그룹에서 50개 이상의 선충을 무작위로 선택하여 머리 부위에 GFP 표지된 양측 ASH 뉴런이 있는 선충의 수를 계산합니다. ASH 뉴런의 생존율 계산:
      신경 세포 생존율(%) = figure-protocol-1
      여기서 N생존 및 N합계는 각각 GFP 양성 ASH 뉴런을 가진 선충의 수와 각 그룹에서 테스트된 선충의 총 수입니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
C. 예쁜꼬마선충 균주
HA759 rtIs11 [osm-10p::GFP + osm-10p::HtnQ150 + dpy-20(+)]Caenorhabditis Genetics Center (CGC) (Caenorhabditis Genetics Center, 카에노르하브디티스 유전학 센터)https://cgc.umn.edu/strain/HA759
대장균 균주
오피50Caenorhabditis Genetics Center (CGC) (Caenorhabditis Genetics Center, 카에노르하브디티스 유전학 센터)https://cgc.umn.edu/strain/OP50
시약
아가로스바이오웨스트111860
아지드화나트륨공급자:Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.80115560https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/5e981aa807664e26af
551E96FF5F07CD
설비
48웰 세포 배양 플레이트공급자:Nest Biotechnology Co., Ltd.748001https://www.cell-nest.com/page94?_l=en&product_id=85
형광 현미경광저우 마이크로 탄 광학적인 기술 Co., 주식 회사.엠샷 MF31-LEDhttps://www.mshot.com/article/442.html
High-content 이미징 시스템분자 장치ImageXpress 피코https://www.moleculardevices.com/products/cellular-imaging-systems#High-Content-Imaging
마이크로 원심분리기진컴퍼니제네스피드 X1https://www.genecompany.com/index.php/Home/Goods/goodsdetails/gid/189.html
현미경 디지털 카메라광저우 마이크로 탄 광학적인 기술 Co., 주식 회사.MS60 (영문https://www.mshot.com/article/677.html
마이크로파메이디 코퍼레이션 엠1-211Ahttps://www.midea.cn/10000/10000000001
파라필름 M시그마-알드리치P7793-1개https://www.sigmaaldrich.cn/CN/en/product/sigma/p7793?context=product
소프트웨어
이미지 획득 및 분석 소프트웨어분자 장치메타익스프레스https://www.moleculardevices.com/ 제품/cellular-imaging-systems/ acquisition-and-analysis-software/ Metaxpress
년 )

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

Caenorhabditis elegansASHGFP

관련 논문