방법 논문

화학적으로 결합된 항체-항원 접합체를 검증하기 위한 효소 결합 면역흡착제 분석

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2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

출처: Volckmar, J. et al., 체외 및 생체 내 마우스 수지상 세포를 표적으로 하기 위한 전체 길이 단백질을 가진 정제된 DEC-205 지시 항체의 화학적 접합. J. Vis. 특급 (2021년)

이 동영상은 샌드위치 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA) 기법을 통해 화학적으로 접합된 항체-항원 복합체를 검출하는 방법을 보여줍니다. 포획된 항체는 항체-항원 접합체의 항원의 특이적 에피토프에 결합하며, 이는 나중에 효소 결합 2차 항체를 사용하여 시각화할 수 있습니다.

프로토콜

1. 하이브리도마 세포주 NLDC-145에서 αDEC-205 생산

  1. 항체 생산을 위해 수조에서 37°C에서 αDEC-205를 생성하는 NLDC-145 세포를 동결 보존했습니다. 37 °C 및 5 % CO2 에서 셀을 확장하십시오. 항체 생산을 진행하려면 75cm2병 2개가 필요합니다. 세포 배양 절차는 안전한 작업 조건을 보장하고 배양물의 오염을 방지하기 위해 안전 캐비닛에서 수행해야 합니다.
    1. 1% 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 ISF-1 배지 9mL(37°C로 예열)에 해동된 세포 1mL(1 x 106 - 5 x 10,6 cells/mL)를 세포 배양 플라스크(25cm2)에 재현탁합니다. 플라스크를 37 ° C, 5 % CO2의 세포 배양 인큐베이터에 수평으로 놓습니다.
    2. 70 % 합류 할 때까지 37 ° C 및 5 % CO2 에서 세포를 배양합니다. 이것은 일반적으로 24 - 48 시간 후에 이루어져야합니다.
    3. 세포가 70% 융합되면 1-10mL 부피 범위의 피펫이 있는 피펫 컨트롤러를 사용하여 전체 NLDC-145 세포 현탁액(10mL)을 15mL 코니컬 원심분리 튜브로 옮깁니다. 실온에서 10분 동안 250 x g에서 원심분리하여 세포를 펠렛화합니다.
    4. ISF-1 배지를 수조에서 37°C로 예열하고 1% 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 12mL의 ISF-1 배지에 펠릿을 재현탁합니다. 재현탁된 세포 현탁액을 신선한 세포 배양 플라스크(75cm2)로 옮깁니다.
    5. 37°C 및 5% CO2에서 1% 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 ISF-1 배지에서 70% 융합 및 99% 생존 가능할 때까지 세포를 배양하고 확장합니다. 이것은 일반적으로 48 - 72 시간 후에 달성되어야합니다.
    6. 세포를 75cm2 플라스크 2개로 나눕니다. 이를 위해 먼저 세포 배양 플라스크 바닥/배양 표면을 세포 현탁액으로 세척하여 표면에서 모든 NLDC-145 세포를 제거합니다. NLDC-145 세포 현탁액 6mL를 각각 2개의 새로운 75cm2병 중 하나에 옮기고 1% 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 예열 ISF-1 배지를 최대 12mL까지 추가합니다.
      메모: NLDC-145 세포가 배지를 조절할 것이므로 세포 배양 배지를 갱신하지 마십시오. 세포를 배지와 함께 옮기고 새로운 배지로 원하는 부피까지 배양액을 채웁니다. 이는 NLDC-145 세포의 생존력과 최대 항체 생산에 매우 중요합니다.
    7. 일반적으로 48 - 72 시간 후에 달성되는 약 70 % 합류까지 37 ° C 및 5 % CO2에서 세포 배양을 확장하십시오.
    8. 세포가 70% 융합되면 각 75cm2병에서 팽창된 NLDC-145 세포 현탁액 10mL를 하나의 PETG(폴리에틸렌 테레프탈레이트 글리콜) 롤러 병(1,050cm2)으로 옮깁니다. 이를 위해 세포 배양 플라스크 바닥/배양 표면을 세포 현탁액으로 세척하고 피펫 컨트롤러와 10mL 피펫을 사용하여 표면의 모든 세포를 제거합니다.
    9. 1% 페니실린/스트렙토마이신(37°C로 예열)이 보충된 ISF-1 배지 140mL를 배지 병에서 직접 롤러 병이 들어 있는 각 NLDC-145에 150mL 표시까지 채웁니다.
      메모: 1.1.6단계의 참고 사항을 참조하십시오.
    10. 롤러 병을 3 일 동안 37 ° C, 5 % CO2 및 25 라운드 / 분에서 배양합니다.
    11. 1% 페니실린/스트렙토마이신(37°C로 예열)이 보충된 ISF-1 배지 150mL를 롤러 병이 들어 있는 NLDC-145 각각에 300mL 표시까지 채웁니다.
    12. 이제 300mL 배양액이 포함된 롤러 병을 37°C, 5% CO2 및 25라운드/분에서 3일 동안 더 배양합니다.
    13. 1% 페니실린/스트렙토마이신(37°C로 예열)이 보충된 ISF-1 배지 100mL를 롤러 병이 들어 있는 NLDC-145 병에 각각 추가하여 400mL 표시까지 채웁니다.
    14. 현재 400mL 배양액이 포함된 롤러 병을 각각 37°C, 5% CO2 및 25라운드/분에서 7일 동안 추가로 배양합니다.
      메모: 이 주 동안 배양은 매우 조밀해지고(최대 95% 밀도) 생존율이 감소하여(최소 50%까지) 항체 방출을 극대화할 수 있습니다.
  2. 배양 상등액에서 αDEC-205를 정제하려면 NLDC-145 세포 현탁액(두 롤러 병 모두에서)을 500mL 오토클레이브 원심분리 병에 직접 붓습니다.
    메모: 총 800mL의 배양액을 수집해야 합니다.
    1. 8,600 x g 및 4°C에서 30분 동안 배양물을 원심분리하여 세포와 파편을 제거합니다.
    2. 상층액을 모으고, 펠릿을 버리고, 상등액을 멸균 시약 병에 모읍니다.
      메모: αDEC-205의 정제는 즉시 시작하거나(2단계) 상층액을 4°C에서 단기간 보관할 수 있습니다.

2. NLDC-145 세포 상등액에서 αDEC-205 항체 정제

참고: NLDC-145 세포 상등액에서 αDEC-205는 단백질 G Sepharose 컬럼(재사용 가능)을 사용하여 정제됩니다. 컬럼 치수는 15mm x 74mm이며 컬럼당 5mL 단백질 G Sepharose가 패킹되어 있습니다.

  1. 단백질 G 세파로스 컬럼의 준비 및 세척을 위해 단백질 G 세파로스 컬럼의 상단 입구에 밀폐된 고무 플러그를 끼웁니다. 두 개의 멸균 캐뉼러(20G x 1 1/2", 0.90 x 40mm)로 고무 플러그에 구멍을 뚫습니다.
    1. 10mL 주사기를 두 캐뉼러 중 하나에 연결하고 튜빙 커넥터가 있는 유연한 실리콘 튜브(길이 약 100cm, 직경 2.5 - 3mm)를 두 번째 캐뉼러에 연결합니다.
      메모: 주사기/고무 플러그 구조는 재사용이 가능하며 진공을 제공하여 대량의 배양 상등액이 단백질 G Sepharose 컬럼으로 지속적으로 흐를 수 있도록 합니다. 이를 위해 주사기의 플런저를 약간 뒤로 당겨 다음 단계에서 지속적인 유체 흐름을 보장합니다.
    2. 50mL의 0.1M 빙초산(pH 2)으로 컬럼을 세척하여 이전의 항체 정제에서 잠재적으로 남아 있는 항체를 제거합니다. 실리콘 튜브의 끝을 0.1M 빙초산(pH 2)으로 채워진 시약 병에 넣습니다. 유도 진공의 결과, 0.1M 빙초산(pH 2) 50mL가 단백질 G 세파로스 컬럼을 적< 통과합니다> 참고: 0.1M 빙초산(pH 2)은 시약 병에 보관하거나 비커에 새로 채워야 합니다.
    3. 100-200mL의 인산염 완충 식염수(PBS)로 컬럼을 세척합니다. 실리콘 튜브의 끝을 PBS로 채워진 시약 병이나 비커에 넣습니다. 100-200mL PBS를 단백질 G Sepharose 컬럼을 통해 적방울로 실행합니다.
  2. NLDC-145 상등액에서 항체를 정제하려면 NLDC-145 상등액(1.2.2단계에서 얻음) 800mL를 컬럼에 로드합니다. 실리콘 튜브의 끝을 NLDC-145 상등액으로 채워진 시약 병에 넣습니다. 800mL NLDC-145 상등액을 컬럼을 통해 적변으로 흐르게 합니다.
    1. 500mL의 PBS로 컬럼을 세척합니다. 실리콘 튜브의 끝을 PBS로 채워진 시약 병 또는 비커에 넣습니다. 500mL PBS를 컬럼 통과로 적변시킵니다.
    2. 용출을 위해 20개의 1.5mL 튜브와 100μL의 1.5M Tris-HCl(pH 8.8)을 각 1.5mL 튜브에 피펫팅합니다. 컬럼과 피펫 1mL의 0.1M 글리신(pH 3)을 단백질 G Sepharose 컬럼의 상부 챔버로 분리하여 컬럼에서 항체를 용리시킵니다. 준비된 1.5mL 튜브 중 하나에서 용출액으로 직접 플로우를 수집합니다.
    3. 20개의 튜브(1.5mL) 모두에 대해 용리 단계(2.2.2.)를 반복합니다.
    4. 항체 함유 분획을 식별하기 위해 분광 광도계를 사용하여 280nm(OD280)에서 모든 용리 분획의 광학 밀도를 측정합니다.
      메모: 첫 번째 용리 분획을 블랭크로 사용합니다.
    5. OD280이 0.5보다 큰 모든 분수(약 10개 분수)를 풀링합니다.
    6. 20% 에탄올로 채워진 단백질 G Sepharose 컬럼을 4°C에서 보관합니다.
  3. 12 - 14 kDa의 분자량 컷오프(MWCO)를 가진 투석 튜브를 사용하여 4°C에서 1000 mL PBS(2000 mL 비커)에 대한 통합 용리액을 밤새 투석합니다.
    1. 투석 튜브를 20cm 조각으로 자릅니다.비이커에서 10mM EDTA(pH 7.5) 500-800mL의 투석 튜브를 핫 플레이트를 사용하여 30분 동안 끓여 오염을 제거합니다. 10mM EDTA(pH 7.5) 용액을 버리고 투석 튜브를 탈이온수에 10분 동안 끓입니다.
      메모: 투석 튜브는 직접 사용하거나 다음 사용까지 4 °C에서 0.01 % 아 지드 화 나트륨 (NaN3) / H2O 용액에 보관할 수 있습니다.
    2. 적절한 투석 튜브 마개/일체형 힌지 클램프로 투석 튜브의 바닥을 닫고 항체 용출액을 투석 튜브에 조심스럽게 피펫팅합니다. 두 번째 클램프로 투석 튜브의 상단을 닫습니다.
    3. 투석 튜브의 상단 클램프를 플로팅 스탠드에 고정하고 자기 교반 막대와 함께 PBS로 채워진 비커에 넣고 비커를 자기 교반기에 놓습니다.
    4. 4 °C에서 밤새 저어 투석합니다.
  4. αDEC-205의 농도를 높이려면 전체 투석액을 10kDa MWCO의 원심 농축기에 로드합니다. 튜빙의 클램프 하나를 열고 투석 튜빙에서 나온 전체 투석액을 원심 농축기(10kDa MWCO)로 조심스럽게 피펫팅합니다.
    메모: 피펫 팁으로 집중 장치 바닥을 만지지 마십시오.
    1. 693 x g (2,000 rpm) 및 4 °C에서 30분 동안 원심분리기.
    2. 693 x g(2,000rpm) 및 4°C에서 10mL의 PBS와 원심분리를 10mL의 원심분리기에 남은 항체 용액의 최종 부피가 1-1.5mL가 될 때까지 로드합니다.
      메모: 필요한 경우 2.4.1의 원심분리 단계를 반복합니다. 원하는 양으로 조정합니다.
    3. 분광 광도계를 사용하여 280nm(OD280)에서 농축된 αDEC-205 용액의 광학 밀도를 측정합니다. PBS를 공백으로 사용합니다.
    4. 다음 공식을 사용하여 αDEC-205의 농도를 계산합니다
      농도 [mg/mL] = OD280/1.4.
    5. 0.22μm 실린지 필터 장치를 사용하여 αDEC-205 용액을 필터링합니다.
      메모: NLDC-145 하이브리도마 세포 상등액에서 αDEC-205를 FPLC(fast protein liquid chromatography)로 정제할 수도 있습니다. 정제된 αDEC-205는 장기 보관을 위해 4°C 또는 -18°C에서 보관할 수 있습니다.

3. αDEC-205에 대한 OVA의 화학적 접합

참고: 최적의 화학적 접합을 위해서는 0.5mg OVA 단백질과 2.5mg αDEC-205(1:5)의 비율이 필요합니다. 그러나 이 비율은 다른 단백질 및 항체에 따라 달라질 수 있으며 대체 접합체에 대해 최적화해야 합니다. OVA 단백질의 이황화 결합의 감소는 30mM TCEP-HCl을 사용한 배양을 통해 수행되며, 이는 αDEC-205에 대한 화학적 접합을 위한 sulfhydryl-group을 노출시키고 3.2단계에서 240μl의 TCEP-HCl이 필요합니다. TCEP에 의한 OVA 감소(3.1단계)와 αDEC-205의 sulfo-SMCC 활성화(3.2단계) 두 단계를 동시에 수행하는 것이 바람직합니다.

  1. 125mM TCEP-HCl 용액(pH 7.0)을 새로 준비합니다. 원하는 양의 TCEP-HCl의 무게를 측정하고 TCEP-HCl을 0.9M Tris 염기(pH 8.8)에 용해시킵니다. pH 지시 스트립을 사용하여 125mM TCEP-HCl 용액(중성이어야 함)의 pH를 테스트하고 Tris 베이스(pH 8.8)로 pH를 조정합니다.
    1. 200 μL OVA 단백질 용액(0.5 mg OVA 함유)을 1.5 mL 멸균 튜브에 피펫으로 넣습니다. 피펫을 사용하여 240μl, 125mM TCEP-HCl 및 560μL의 멸균 초순수를 0.5mg/mL OVA 단백질 및 30mM TCEP-HCl(OVA/TCEP-HCl)의 최종 농도로 추가합니다.
      참고: 2.5mg EndoGrade OVA(동결건조)를 1mL PBS에 용해시켜 2.5mg/mL OVA 용액을 생성합니다.
    2. 생성된 OVA/TCEP-HCl을 실온에서 1.5h.
      동안 배양합니다. 메모: 이 배양 단계를 연장하지 마십시오.
  2. 접합을 위해 αDEC-205를 활성화하려면 2mg의 sulfo-SMCC를 100μL의 초순수에 용해시킵니다.
    메모: Sulfo-SMCC는 가수분해에 취약합니다. 따라서 더 많은 양의 undissolved sulfo-SMCC를 신속하게 처리하거나 사용 가능한 2mg 분취액을 사용해야 합니다.
    1. 900μL에 2.5mg이 함유되도록 αDEC-205를 PBS에 희석합니다.
    2. 1.5mL 튜브에 2.5mg의 αDEC-205(900μL 용량, 3.2.1단계에서 획득)와 100μL의 sulfo-SMCC(3.2단계에서 획득)를 혼합하여 총 1mL의 부피를 만듭니다.
    3. αDEC-205/sulfo-SMCC 용액을 가열 블록에서 37°C 및 550rpm에서 30분 동안 배양합니다.
  3. 이러한 배양 후 탈염 컬럼(MWCO 7kDa, 5mL 컬럼 부피)을 사용하여 과량의 sulfo-SMCC 및 TCEP-HCl을 용액에서 즉시 제거합니다.
    1. 컬럼(MWCO 7kDa) 하단 마개를 비틀어 분리하고 캡을 푼 다음 컬럼을 15mL 원뿔형 튜브에 넣습니다.
    2. 액체를 제거하기 위해 실온에서 2 x g에서 1,000 x g로 2분 동안 원심분리기를 사용합니다.
    3. 새 튜브에 컬럼을 넣고 캡을 제거합니다. 항체/sulfo-SMCC 및 OVA/TCEP-HCl을 각각 컬럼 1개로 구성된 소형 수지 베드의 중앙에 천천히 로드합니다.
    4. 실온에서 1,000 x g에서 2분간 원심분리기
      5. .
    5. 사용 후에는 열을 버리십시오. 접합을 위해 준비된 항체와 OVA를 포함하는 용액은 튜브에 있습니다.
    6. αDEC-205 및 OVA의 접합을 위해 피펫팅을 통해 두 용액을 즉시 혼합합니다.
    7. 생성된 αDEC-205 및 OVA 혼합물을 4°C에서 하룻밤 동안 배양합니다.
  4. 접합 후 용액에서 과량의 결합되지 않은 OVA를 제거하고 원심 단백질 농축기(MWCO 150kDa)를 사용하여 결합된 αDEC-205/OVA를 농축합니다.
    1. 컬럼에 PBS 12mL를 피펫팅하고 실온에서 2,000 x g로 2분 동안 원심분리하여 원심 단백질 농축기(MWCO 150 kDa)를 미리 헹굽니다.
      메모: 필요한 경우 약 5mL의 부피가 컬럼을 통과할 때까지 원심분리 단계(3.4.1)를 반복합니다.
    2. αDEC-205/OVA를 원심 단백질 농축기에 로드하기 전에 웨스턴 블롯 분석을 위해 20μL의 비농축 αDEC-205/OVA 샘플을 보관합니다. 이 부분 표본은 분석할 때까지 4°C에서 보관하십시오.
    3. pipetting.
      를 통해 αDEC-205/OVA를 원심 단백질 농축기에 로드합니다. 메모: 원심 농축기의 상부 챔버 침대와의 접촉을 피하십시오.
    4. 농축기에 PBS를 15mL까지 채우고 실온에서 2,000 x g에서 5분 동안 농축기를 원심분리합니다.
    5. 웨스턴 블롯 분석을 위해 유수(유류 I)의 샘플을 저장하고 나머지 유류는 폐기합니다.
    6. PBS로 농축기를 10mL까지 채우고 실온에서 2,000 x g에서 최소 8분 동안 농축기를 원심분리합니다.
    7. 웨스턴 블롯 분석을 위해 두 번째 유류(유류 II)를 위해 샘플을 저장하고 나머지 유류는 폐기합니다.
    8. 원하는 농축이 이루어지면(약 1.5mL의 αDEC-205/OVA 용액을 상부 챔버에 남겨 두어야 함) 농축된 샘플을 천천히 흡입합니다.
      메모: 상부 챔버에 유체가 너무 많이 남아 있으면 원심분리를 반복할 수 있지만 가능한 한 짧게 유지해야 합니다.
  5. 생성된 αDEC-205/OVA의 단백질 농도를 미량 분광 광도계를 사용하여 측정합니다. PBS를 공백으로 사용합니다.
  6. 0.22μm 실린지 필터 장치를 사용하여 αDEC-205/OVA를 필터링합니다.
    메모: 추후 분석 및 생체 내 실험을 위해 αDEC-205/OVA를 4°C 또는 -18°C에서 보관할 수 있습니다.

4. ELISA에 의한 화학적 접합 검증

  1. αDEC-205/OVA를 생성하는 성공적인 화학적 접합에 대한 추가 검증을 위해 ELISA를 수행합니다.
  2. 코팅 완충액(0.1M 중탄산나트륨(NaHCO3), H2O로 희석된 pH 9.6)에 3ng/μL 토끼 αOVA 항체 100μL/웰로 적절한 96웰 ELISA 플레이트를 코팅합니다.
    1. 플레이트를 4 ° C에서 밤새 배양하십시오.
  3. 코팅 후 예를 들어 ELISA 와셔를 사용하여 PBS로 플레이트를 세 번 세척합니다.
  4. 플레이트의 각 웰에 200μL의 블로킹 버퍼(PBS의 경우 10% FCS)를 피펫팅하여 플레이트를 막고 실온에서 30분 동안 플레이트를 배양합니다.
  5. αDEC-205/OVA(단계 3.6에서 획득) 1:2를 블로킹 버퍼(PBS의 10% FCS에서 획득)에 연속 희석하여 6 μg/mL에서 93.8 ng/mL αDEC-205/OVA까지의 희석액을 얻고 이러한 감소량 중 100 μL/웰을 웰에 추가합니다.
    1. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 배양합니다.
  6. 예를 들어 ELISA 와셔를 사용하여 PBS로 접시를 세 번 세척합니다.
  7. 플레이트의 각 웰에 염소 αrat-IgG+IgM(H+L)-HRPO 항체 100μL(차단 버퍼에서 1:2,000으로 희석(PBS에서 10% FCS))를 추가합니다.
    1. 실온에서 1시간 동안 배양합니다.
  8. PBS를 사용하여 접시를 세 번 세척합니다(예: ELISA 와셔 사용).
  9. 웰에 50μL의 HRPO 기질을 추가합니다. 선명한 색상 반응을 관찰할 경우 웰당 150μl의 정지 용액(1M H2SO4)을 첨가하여 반응을 정지합니다.
  10. 5분 후 ELISA 리더를 사용하여 450nm에서 흡수를 읽습니다.

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공개 사항

선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
차단 버퍼(ELISA)PBS의 10% FBS
세포 배양 플라스크 T25Greiner 바이오 원690175우리는 표준 CELLSTAR 필터 캡 세포 배양 플라스크를 사용합니다. 또는 현탁 배양 플라스크를 사용합니다 (690195 )
세포 배양 플라스크 T75Greiner 바이오 원658175당사는 표준 CELLSTAR 필터 캡 세포 배양 플라스크를 사용합니다.또는 현탁 배양 플라스크(658195)를 사용합니다.
세포 배양 플라스크 T175Greiner 바이오 원661175당사는 표준 CELLSTAR 필터 캡 세포 배양 플라스크를 사용합니다.또는 현탁 배양 플라스크(661195)를 사용합니다.
원심 농축기 MWCO 10 kDa싸토리우스VS2001Vivaspin 20 원심 농축기
원심 단백질 농축기 MWCO 100 kDa, 5 - 20 ml써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific88532Pierce 단백질 농축기, PES 5 -20 ml; 우리는 Pierce 집중 장치 150K MWCO 20mL (카탈로그 번호 89921)를 사용하지만 더 이상 사용할 수 없습니다
원심분리기 병날진525-2314PP(폴리프로필렌) 나사 마개가 있는 PPCO(폴리프로필렌 공중합체), 500ml, 독일 VWR에서 획득
코팅 버퍼(ELISA)H2O(pH 9.6)의 0.1M 중탄산나트륨(NaHCO3)
탈염 컬럼 MWCO 7 kDa써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific89891Thermo Scientific Zeba 스핀 탈염 컬럼, 7K MWCO, 5mL
검출 시약 ELISA(HRPO 기질)시그마-알드리치/머크T8665-100ML3,3",5,5"-테트라메틸벤지딘(TMB) 액체 기판 시스템
ELISA 96웰 플레이트써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific442404MaxiSorp Nunc-면역 플레이트
태아 송아지 세럼(주)범바이오텍P40-47500FBS 굿 포르테
ISF-1 배지바이오크롬/바이오스위스텍팩스 9061-01
NLDC-145 하이브리도마증권 시세HB-290아직 손에 잡히지 않았다면, 하이브리도마 세포는 ATCC에서 획득할 수 있습니다
오브알부민Hyglos (BioVendor를 통해)321000<0.1 EU/mg의 EndoGrade OVA 초순수
페니실린/스트렙토마이신써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific15140122Gibco 페니실린/스트렙토마이신 10.000 U/ml; 대안적으로 Gibco 페니실린/스트렙토마이신 5.000 U/ml (15070-063)를 사용할 수 있습니다
PETG 폴리에틸렌 테레프탈레이트 글리콜 세포 배양 롤러 병Nunc 체외Tel.: 734-2394표준 PDL 코팅, 통기형(1.2X), 1050 cm², 100 - 500 ml 용량; 독일 VWR에서 획득
pH 지시 스트립머 크109535pH 지시약 스트립 0-14
다클론 염소 αrat-IgG+IgM-HRPO 항체 (ELISA)잭슨 이뮤노리서치 Tel.: 112-035-068독일 디아노바에서 획득; ELISA를 위해 1:2000에 사용됨
다클론 토끼 αOVA (ELISA)아브캠AB1816883ng/μl에서 사용
단백질 G 세파로스 컬럼머크/밀리포어P32965ml 단백질 G 세파로스, 패스트 플로우가 빈 컬럼 PD-10에 패킹되어 있습니다(Merck, GE 17-0435-01).
고무 플러그옴니랩5230217DEUTSCH & NEUMANN 러버 스토퍼(하부 Φ 17 mm, 상부 Φ 22 mm)
실리콘 튜브옴니랩5430925DEUTSCH & NEUMANN (내부 Φ 1mm, 외부 Φ 3mm)
슬림-패스트우리는 약국에서 무료로 구할 수 있는 일반 슬림 패스트 초콜릿을 사용했는데, 이 웨스턴 블롯 접근 방식에서 분유보다 더 나은 결과를 얻었기 때문입니다
정지 솔루션(ELISA)1엠디엄 H2SO4
설포-SMCC써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific22322Pierce Sulfo-SMCC Cross-Linker; 카탈로그 번호 A39268 (10 x 2 mg)을 사용하거나, 카탈로그 번호 A39268 (10 x 2 mg)을 사용합니다.
주사기 필터 장치 0.22 μm 머크/밀리포어SLGV033RSMillex-GV 실린지 필터 유닛, 0.22 μm, PVDF, 33 mm, 감마 멸균
주사기 10 ml옴니랩일회용 주사기 Injekt® Solo B.Braun
스테리칸® 캐뉼러B. 브라운Sterican® G 20 x 1 1/2""; 0.90 x 40 mm; 노란색
TCEP-HCl써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher ScientificA35349 (영문
튜빙 커넥터옴니랩Kleinfeld 실리콘 튜브용 소형 튜빙 커넥터
시리즈 ) . 년 ) ) 표시기 시리즈 호 ) . (영문) ) 년 ) )

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