아미노산의 세포 흡수를 정량화하기 위한 방사성 표지된 아미노산 흡수 분석

초록

출처: Shen, L., et al. 배양된 뼈 세포 및 분리된 뼈 샤프트의 아미노산 소비 평가. J. Vis. 특급 (2022).

이 동영상은 골수 유래 기질 세포의 아미노산 흡수를 추정하기 위한 체외 기술을 보여줍니다. Na⁺-의존성 아미노산 수송체는 세포 내부의 방사성 표지된 아미노산의 흡수를 매개하며, 세포 흡수는 방사능을 측정하여 추정합니다.

프로토콜

방사성 물질(RAM)의 사용은 각 기관의 지정 안전 위원회의 사전 승인이 필요합니다.

1. 세포의 아미노산 흡수

1. 플레이트: 5 x 10,⁴ ST2 세포를 12웰 조직 배양 플레이트의 각 웰에 있습니다. 10% FBS, 100U/mL 페니실린 및 0.1μg/mL 스트렙토마이신(Pen/Strep)을 함유한 α-MEM의 플레이트 셀. 1.12단계에서 정규화에 대한 조건별 세포 수를 정량화하기 위해 세포의 추가 웰을 플레이트화합니다. 37°C의 가습된 세포 배양 인큐베이터에서 5% CO₂로 세포를 배양합니다.
2. 합류할 때까지 2-3일 동안 세포를 배양합니다.
3. 실험 당일, 다음 용액을 준비합니다: 1x 인산염 완충 식염수(PBS), pH 7.4 및 크렙스 링거 헤페스(KRH) 완충액, pH 8.0: (120 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂, NaHCO₃, 5 mM HEPES, 1 mM D-글루코스). 37 °C로 예열합니다.
4. 배지를 흡인하고 1x PBS 1mL, pH 7.4.
   로 세포를 두 번 세척합니다. 메모:

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.25% 트립신	지브코	25200
12웰 플레이트	코 닝	3513
Beckman LS6500 섬광 카운터
염화칼슘	시그마	C1016
염화콜린	시그마	C7077
D-(+)-포도당 용액	시그마	G8769 (영문
디피에스	지브코	14190
헵스(1M)	지브코	15630
L-[3,4-3H(N)]-글루타민	퍼킨엘머	NET551250UC
액체 섬광 바이알	시그마	Z190535
염화리튬 용액, 8M	시그마	L7026
염화마그네슘	시그마	M8266
맘α	지브코	12561
마이크로 원심분리기 튜브, 15mL	바이오틱스	89511-256
염화칼륨	시그마	P3911
중탄산나트륨	시그마	S6014
소금	시그마	S9888
나트륨 도데 실 설페이트	시그마	436143
Ultima Gold(신틸레이션 솔루션)	퍼킨엘머	6013329
α-(메틸아미노)이소부티르산	시그마	M2383

년 년 ) 년 년 년 (영문) 시리즈