단일 분자 수준에서 항원-항체 상호 작용을 연구하기 위한 대량 측광

초록

출처: Wu, D. et. al., 질량 측광에 의한 항체-항원 친화도의 신속한 측정. J. Vis. 특급.(2021년)

이 비디오에서는 유동 챔버에서 항원-항체 상호 작용을 연구하기 위해 질량 측광을 사용하는 방법을 보여줍니다. 집중된 빛은 분자의 질량에 따라 다르게 산란됩니다. 검출기는 산란된 빛을 수집하고 간섭 패턴을 분자 질량과 상관관계가 있는 다양한 강도의 스폿으로 생성합니다.

프로토콜

1. 플로우 챔버 준비

1. 유리 커버 슬립 청소
   1. 증류수, 에탄올, 이소프로판올이 든 세척 병을 사용하여 24mm x 50mm 커버슬립을 물, 에탄올, 물, 이소프로판올, 물의 순서로 헹굽니다. 깨끗한 질소 흐름으로 커버슬립을 건조시킵니다. 부드러운 끝의 집게로 하단 모서리를 잡고 커버 슬립을 위에서 아래로 헹구는 것이 중요합니다. 겸자에서 오염물이 옮겨지지 않도록 커버슬립을 같은 방향으로 건조시킵니다(그림 1A).
   2. 마찬가지로 24mm x 24mm 커버슬립을 증류수, 에탄올 및 증류수로 헹굽니다. 깨끗한 질소 흐름으로 커버슬립을 건조시킵니다.
   3. 커버슬립의 작동 면을 확인하고 깨끗한 커버슬립 표면에 증류수 한 방울을 떨어뜨린 다음 프로토콜의 3.1–3.2단계를 따릅니다. 일반적으로 24mm x 50mm 커버슬립의 한쪽 면만 MP 측정에 적합한 광학 품질을 가지고 있습니다.
      메모: 초점을 맞춘 후에는 심각한 표면 결함이 감지되지 않아야 하며 데이터 수집 소프트웨어에 표시된 "신호" 값은 0.05% 미만이어야 합니다(그림 2A-C). 상자에 있는 모든 커버슬립의 작업면은 같은 방향을 향합니다. 커버슬립 청소의 효율성을 테스....

결과

그림 1: MP 플로우 챔버 준비 및 로딩.(A) 세척 절차를 위한 커버슬립 고정 위치. (B) 알루미늄 호일(하단 층, 표시되지 않음) 표면에 24 x 24mm 커버슬립(중간 층)과 양면 테이프(상단 층)의 정렬. 파란색 파선은 절단선의 위치를 나타냅니다. (C) 두 개의 샘플 채널이 있는 조립된 플로우 챔버의 상단 및 측면 모습, 그리고 조립된 플로우 챔버의 사진. (D) 이전에 버퍼로 채워진 유동 채널로의 샘플 로딩 절차.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
어쩌다	레펜		MP 데이터 수집 소프트웨어
반인륜 트롬빈	혈액 기술	AHT-5020	RRID: AB_2864302
코튼 팁 애플리케이터	쏘랩스	CTA10	렌즈 청소를 위한 면 광학 면봉
커버슬립 24x24mm	글로브 사이언티픽	1405-10
커버슬립 24x50mm	피셔 사이언티픽	12-544-EP
디스커버MP	레펜		MP 데이터 처리 소프트웨어
집게	전자 현미경 과학	78080-CF	커버슬립 취급을 위한 부드러운 팁 겸
인간 α-트롬빈	혈액 기술	HCT-0020
이멀젼 오일	쏘랩스	모일-30
이소프로파놀	알파 에자르	36644
마이크로소프트 엑셀	마이크로소프트		스프레드시트
원MP	레펜		질량 측광 기기
기원	오리진랩		과학적인 그래프 작성 소프트웨어
PBS (PBS)	코 닝	46-013-CM	10x 주식
주사기 필터	밀리포어	SLGSR33SS	버퍼 및 샘플 필터링

시리즈 년 시리즈 자