리간드와 분석물 간의 상호 작용을 감지하기 위한 Biolayer Interferometry 기술

Abstract

출처: Desai, M., et al. 전사에서 단백질-단백질 상호 작용을 연구하기 위한 BLI(Biolayer Interferometry)의 적용. J. Vis. 특급 (2019년)

이 동영상에서는 리간드와 표적 분석물 간의 분자간 상호 작용을 실시간으로 검출하는 BLI(Biolayer Interferometry) 기술을 시연합니다. BLI는 용액 내 분석물과 상호 작용할 때 바이오센서 표면의 고정된 리간드 층에서 반사된 백색광의 간섭 패턴 변화를 측정합니다.

Protocol

1. 바이오센서 수화 및 분석 설정

1. BLItz 기기를 켭니다.
2. 기기가 기기 뒷면의 USB 데이터 출력 포트를 통해 컴퓨터에 연결되어 있는지 확인하십시오.
3. 컴퓨터에서 관련 소프트웨어(예: BLItz Pro)를 열고 화면 왼쪽에 있는 Advanced Kinetics를 클릭합니다.
4. 소프트웨어에서 각 제목 아래에 실험에 대한 모든 적절한 정보(실험 이름, 설명, 샘플 ID 및 단백질 농도 포함)를 입력합니다.
5. Biosensor Type(바이오센서 유형)을 클릭하고 드롭다운 메뉴에서 Ni-NTA를 선택합니다.
   1. 실행 설정 제목에서 셰이커가 사용으로 설정되어 있는지 확인합니다.
   2. 단계 유형 목록 제목 아래에 초기 기준선, 로드, 기준선, 연결 및 분리의 5개 항목이 나열되어 있는지 확인합니다.
      메모: 각 단계의 기간은 필요에 따라 기본값에서 변경할 수 있습니다. 최적의 결과를 얻으려면 Initial Baseline 및 Baseline에 최소 30초를 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BLItz 기계	포르테바이오	45-5000	장치
Ni-NTA 바이오센서 트레이 담그기 및 읽기	포르테바이오	제18-5101	poly-His-tagged 단백질을 위한 즉시 사용 가능한 Ni-NTA 바이오센서
드롭 홀더	포르테바이오	제45-5004	장치
PCR 튜브(0.2mL)	토마스 사이언티픽	CLS6571	플라스틱 도자기
마이크로 원심분리기 튜브(검정색)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	전화 03-391-166	플라스틱 도자기
킴와이프	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	06-666ᅡ	플라스틱 도자기
디티(DTT)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	R0861	화학
에디타	밀리포어시그마	E6758	화학
재질 보기 MgCl2	밀리포어시그마	M8266	화학
염화나트륨	밀리포어시그마	S9888	화학
트리스 - HCl	골드바이오	T095100	완충기