쥐 모델에서 안구 표면 염증을 유도하는 방법

Abstract

출처: Singh, J., et al. 안구 표면 염증 유도 및 관련 조직 수집. J. Vis. 특급 (2022년)

이 비디오는 쥐 모델에서 안구 표면 염증 및 마이봄샘 기능 장애를 유도하는 방법을 보여줍니다. 면역원을 사용하여 마우스의 면역 체계를 자극한 후 동일한 면역원으로 재자극하면 안구 표면 염증이 촉진되어 호중구에서 생성된 응집체를 통한 마이봄샘 분비물이 막히고 안구건조증을 유발합니다.

Protocol

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 쥐 안구 표면 염증의 유도

1. 면역 준비를 위한 면역원 준비를 수행합니다.
   1. 생리수에 오브알부민(OVA, 50 mg/mL)과 백일해 독소(100 μg/mL)를 섞어 면역원을 1:1 비율로 혼합하여 면역원을 바로 준비합니다><(재료 표 참조). 주의: 층류 안전 캐비닛에서 백일해 독소의 개봉, 재구성 및 면역원 준비를 수행합니다. 보호복을 착용하고 피부와의 접촉을 피하십시오.
   2. 면역원과 보조제 혼합물을 실온에서 30분 동안 배양하고 100μL를 1mL 주사기에 넣습니다.
   3. 마취되지 않은 마우스에서 면역원 용액의 복강 내 주사를 수행합니다.
      1. 케이지 그리드를 잡는 동안 꼬리를 마우스로 부드럽게 잡습니다. 엄지와 검지 사이의 등과 목 부위의 피부를 단단히 잡고 약지와 새끼 손가락 사이의 꼬리와 하지를 손바닥에 고정합니다.
      2. 고정된 마우스는 머리를 아래로 향하게 합니다.
      3. 준비된 면역원 용액 100μL를 하복....

Results

그림 1: 안와 영역을 둘러싼 안면 조직의 절제.절개 트레일은 빨간색으로 표시됩니다. 이를 통해 안구 기관을 절제하고 결막 및 각막과 같은 부속 안구 장기에 대한 다양한 국소 투여 치료제의 영향과 효과를 조사할 수 있습니다.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PBS 1개	지브코
수산화알루미늄	Imject alum Adjuvant	77161	40 mg/mL 최종 농도 : 생체 내 : 1 mg / 100 μL
C57Bl/6 마우스, 7-9주	찰스 리버 연구소
곡선형 집게	FST by Dumont 스위스	5/45 11251-35
가늘고 날카로운 가위	FST 스테인리스 스틸, 독일	15001-08
층류 안전 캐비닛	헤라세이프
NaCl 0.9%(식염수)	B.브라운
오브알부민(OVA)	엔도핏, 인비보젠	9006-59-1	10 mg/200 μL 식염수 중
백일해 독소	써모피셔 사이언티픽	PHZ1174	50 μg/ 500 μL 식염수 최종 농도 : 생체 내 : 100 μg / 100 μL
페트리디쉬	그라이너 바이오 원	628160
메스	깃털 일회용 메스	21위	최종 농도 : 생체 내 : 300 ng / 100 μL
실체현미경	자이스	스테미508
주사기(각막/홍채 세척)	BD 마이크로레인	27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 밀리미터
주사기(i.p 면역)	BD 마이크로레인	24 G1"-Nr 17, 055* 25mm