Organelle Dynamics in B Lymphocytes following Activation with Antigen-Coated Beads

초록

출처: Ibañez-Vega, J., et al., 면역 시냅스 형성 중 B 세포의 세포 소기관 역학 연구. J. Vis. 특급. (2019년)

이 비디오에서는 항원 코팅된 마이크로비드로 활성화된 B 림프구의 소기관 역학을 연구하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

>참고: 다음 단계는 IIA1.6 B 셀을 사용하여 수행되었습니다.

1. 항원 코팅 비드를 사용한 B 세포 활성화

1. 항원 코팅 비드의 준비
   1. B 세포를 활성화하기 위해 활성화(BCR-ligand+) 또는 비활성화(BCR-ligand-) 항원이 있는 3μm NH 2-beads의 50 μL(~20 x 10⁶ beads)를 사용하여 준비된 항원(Ag-coated beads)으로 공유 코팅된 NH_2-beads를 사용합니다.
   2. IIA1.6 B 세포의 경우 항-IgG-F(ab')₂ 단편을 BCR-리간드+로, 항-IgM-F(ab')₂ 또는 소 혈청 알부민(BSA)을 BCR-리간드-로 사용합니다. 일차 B 세포 또는 IgM+ B 세포주를 활성화하려면 항-IgM-F(ab')₂를 BCR-리간드+로, BSA를 BCR-리간드-.
      로 사용합니다. 메모: 리간드가 Fc 수용체에 결합하는 것을 피하려면 전장 항체 대신 F(ab') 또는 F(ab')₂

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
IIA1.6(A20 변형) 마우스 B-림프종 세포	증권 시세	TIB-208	FcγIIR 없이 표면에 IgG 함유 BCR을 발현하는 Balb/c 기원의 쥐 B세포 림프종
100% 메탄올	피셔 사이언티픽	대답412-4
지름 10 mm, 커버 유리, 두께, No. 1, 원형	마리엔필드-수페리어	111500
아미노-다이나비드	써모피셔	14307디
안티 페리센트린	아브캠	ab4448	1:200 희석이 권장되지만 최적화해야 합니다
안티 rab6	아브캠	AB95954	1:200 희석이 권장되지만 최적화해야 합니다
안티 sec61	아브캠	AB15575	1:200 희석이 권장되지만 최적화해야 합니다
증권 시세	윙클러	BM-0150
폴리비드 아미노 마이크로스피어 3.00μm	폴리사이언스	17145-5
폴리-L-라이신	시그마	P8920	멸균수로 희석한다
RPMI-1640	생물 산업	01-104-1ᄀ
트리톤 X-100	머 크	9036-19-5
튜브 50ml	코 닝	353043

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