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방법 논문
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2025년 7월 8일
출처: Gannon, A. D., et al. 녹농균 감염 모델의 실시간 평가를 위한 도구입니다. J. Vis. 특급 (2021).
이 비디오는 녹농균(Pa) 응집체에 대한 항균 처리의 영향을 연구하기 위한 시험관 내 기술을 보여줍니다. 형광 표지된 Pa 세포는 감염 중 성장 패턴을 모방하는 응집체로 성장합니다. 치사량 이하의 항생제 콜리스틴 농도로 응집체에 이의를 제기하면 형광 현미경을 통해 박테리아-항생제 상호 작용에 대한 실시간 평가가 수행됩니다.
1. 합성 낭포성 섬유증 배지(SCFM2)를 제조합니다.
참고: SCFM2 준비는 아래에 설명된 세 가지 주요 단계로 구성됩니다(그림 1).
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그림 1: SCFM2 배지의 준비 및 접종. (A) 완충된 염기는 표 1 및 표 2에 열거된 염 및 아미노산을 사용하여 제조된다. 완충된 염기는 4°C에서 최대 30일 동안 보관할 수 있지만 빛 노출로부터 보호해야 합니다. (B) 완충된 염기의 분취액에 뮤신과 DNA를 첨가하고 4°C에서 하룻밤 동안 용액에 용해시킵니다. (C) 지질 및 추가 스톡을 하룻밤 용액에 첨가하고 250rpm에서 20분 동안 교반하면서 37°C에서 배양한 다음 SFCM2에 OD600 = 0.05에서 세척된 대수상 셀을 접종합니다. 약어: SCFM2 = 합성 낭포성 섬유증 가래 배지.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아미노산 | |||
| 알라닌 | Acrs 유기농 | 56-41-7 | |
| 아르기닌 HCl | MP | 1119년 34월 2 | |
| 아스파라긴 | Acrs 유기농 | 56-84-8 | 0.5 m NaOH에서 준비됩니다 |
| 시스틴 HCl | 알파 에자르 | L06328 | |
| 글루타민산 HCl | Acrs 유기농 | 138-15-8 | |
| 글리신 | Acrs 유기농 | 56-40-6 | |
| 히스티딘 HCl H2O | 알파 에자르 | A17627 | |
| 이소류신 | Acrs 유기농 | 73-32-5 | |
| 신 | 알파 에자르 | A12311 | |
| 라이신 HCl | 알파 에자르 | J62099 | |
| 메티오닌 | Acrs 유기농 | 63-68-3 | |
| 오르니틴 HCl | 알파 에자르 | A12111 | |
| 페닐알라닌 | Acrs 유기농 | 63-91-2 | |
| 프롤린 | 알파 에자르 | A10199 | |
| 세린 | 알파 에자르 | A11179 | |
| 트레오닌 | Acrs 유기농 | 72-19-5 | |
| 트립토판 | Acrs 유기농 | 73-22-3 | 0.2 m NaOH에서 준비됩니다 |
| 티로신 | 알파 에자르 | A11141 | 1.0 m NaOH에서 준비됩니다 |
| 발린 | Acrs 유기농 | 72-18-4 | |
| 항생제 | |||
| 카르베니실린 | 알파 에자르 | J6194903 | |
| 주식의 날 | |||
| 칼슘2* 6H2O | 피셔 케미컬 | C79-500 | |
| 포도당(D-포도당) | 피셔 케미컬 | 50-99-7 | |
| 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DOPC) | 피셔(Avanti 극성 지질) | 4235-95-4 | 클로로포름을 증발시키기 위해 37 °C에서 15-20 분간 흔듭니다 |
| 페소4 * 7H2O | Acrs 유기농 | 7782-63-0 (영문 | 이 재고는 1mg/mL와 같으며 신선하게 만들어야 합니다. |
| L-젖산 | 알파 에자르 | 엘13242 | NaOH를 사용하여 pH 재고를 7로 |
| 마그네슘2 * 6H2O | Acrs 유기농 | 7791-18-6 | |
| N-아세틸글루코사민 | 티씨아이 | A0092 | |
| 준비된 고형물 | |||
| 돼지 뮤신 | 시그마 | M1778-100지 | 자외선 살균 |
| 연어, 정자 DNA | 인비트로젠 | 제15632-011 | |
| 얼룩 | |||
| 프로피듐 요오드화물 | 알파 에자르 | J66764MC | |
| 소금 | |||
| 케이2그래서4 | 알파 에자르 | A13975 | |
| 케이클 | 알파 에자르 | J64189 | 버퍼링된 베이스에 솔리드를 직접 추가 |
| 3 번 | Acrs 유기농 | 7757-79-1 | |
| 걸레 | 알파 에자르 | A12914 | 버퍼링된 베이스에 솔리드를 직접 추가 |
| 염화나트륨 | 피셔 케미컬 | 시즌 271-500 | 버퍼링된 베이스에 솔리드를 직접 추가 |
| 나2HPO4 | 증권 시세 | S23100-500.0 | |
| 나H2PO4 | 증권 시세 | S23120-500.0 | |
| 뉴햄프셔4CL | Acrs 유기농 | 12125-02-9 | 버퍼링된 베이스에 솔리드를 직접 추가 |
| 소모품 | |||
| 원뿔형 튜브(15mL) | 올림푸스 플라스틱 | 28-101 | |
| 원뿔형 튜브(50mL) | 올림푸스 플라스틱 | 28-106 | |
| 배양 튜브(공기 흐름 캡 포함) | 올림푸스 플라스틱 | 21-129 | |
| 35mm 4챔버 유리 바닥 접시 | 셀비스 | NC0600518 | |
| 루리아 베르타니(LB) 육수 | 제네시 사이언티픽 | 11-118 | |
| 인산염 완충 식염수(PBS) | Fisher 생물 시약 | BP2944100 | |
| 피펫 팁 (p200) | 올림푸스 플라스틱 | 23-150RL | |
| 피펫 팁(p1000) | 올림푸스 플라스틱 | 23-165RL | |
| 혈청학적 피펫(5mL) | 올림푸스 플라스틱 | 12-102 | |
| 혈청학적 피펫(25mL) | 올림푸스 플라스틱 | 12-106 | |
| 혈청학적 피펫(50mL) | 올림푸스 플라스틱 | 12-107 | |
| 초순수(RNAse/DNAse 없음), 나노 순수 | 제네시 사이언티픽 | 18-194 | 표 1에서 용액 제조에 사용되는 나노 순수 |
| 주사기(10mL) | BD (영어) | 794412 | |
| 주사기(50mL) | BD (영어) | 309653 | |
| 0.22mm PES 주사기 필터 | 올림푸스 플라스틱 | 25-244 | |
| PS 큐벳 세미 미코 | 올림푸스 플라스틱 | 91-408 | |
| 소프트웨어 | |||
| 바이오렌더 | 그림을 준비하려면 | ||
| 팩스디바6.1.3 | Becton Dickinson, 산호세, CA | ||
| 이마리스 | 비트플레인 | 버전 9.6 | |
| 젠 블랙 | |||
| 설비 | |||
| 팩아리알루 | Becton Dickinson, 산호세, CA | ||
| LSM 880 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경 | 자이스 |
