Biphasic Separation에 의한 인간 혈액 유래 호중구에서 지질의 분리

초록

출처: Brogden, G., et al. 호중구의 지질 변화와 그에 따른 호중구 세포 외 트랩의 형성을 연구하는 방법. J. Vis. 특급 (2017년)

이 비디오는 메탄올과 클로로포름을 사용하는 이위상 용매 시스템에 의한 인간 호중구로부터의 지질 분리를 보여줍니다.

프로토콜

1. 인간 혈액 유래 호중구의 지질 분리 및 분석

1. 호중구를 가져다가 얼음 위에 올려 놓습니다.
2. 얼음 위에서 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 밀봉이 있는 15mL 나사 캡 유리관에 호중구(메탄올 및 클로로포름 용액에 존재)를 피펫팅하고 1분 동안 흔들어 균질화합니다. 유리관을 사용하여 지질이 플라스틱 표면에 결합하는 것을 방지합니다. 고무/플라스틱으로 인한 오염을 방지하기 위해 PTFE 캡을 사용하십시오.
3. 메탄올 2mL를 첨가한 후 1분 후에 클로로포름 1mL를 첨가합니다. 1분 동안 다시 흔듭니다.
4. 유리관을 RT 및 50rpm으로 30분 동안 회전합니다.
5. 용액을 7°C 및 1,952 x g에서 10분 동안 원심분리하여 단백질 분획을 펠렛
화합니다.
6. 단백질 함유 펠릿은 남겨두고 새로운 15mL 유리 스크류 캡 튜브에 상등액을 조심스럽게 디캔팅합니다. 향후 정량화를 위해 펠릿을 -20 °C에서 보관하십시오.
7. 클로로포름 1mL를 넣고 1분 정도 기다렸다가 이중 증류수 1mL를 넣고 유리 나사 뚜껑 튜브를 샘플과 함께 30초 동안 뒤집습니다.
8. 7°C 및 1,952 x g에서 10분 동안 원심분....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
10μl 주사기	해밀턴	701 NR 10 μl
캐뉼러 26G	브라운	4657683
클로로포름	칼 로스	7331.1
메탄올	칼 로스	7342.1
물	칼 로스	3255.1	내독소 무함유