Punch Biopsy를 통한 마우스 모델에서 절제 피부 상처 생성

초록

출처: Anderson, L. S. et al., 황색포도상구균 감염에 대한 선천적 면역 반응을 평가하기 위한 마우스 모델. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오는 마우스 모델에서 정확한 상처를 만들기 위한 펀치 생검 절차를 보여줍니다. 절제는 피부의 피하층을 노출시켜 국소 병원체 감염에 대한 면역 반응을 연구하기에 적합한 부위를 제공합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스 소스 및 하우징

1. 앞서 설명한 바와 같이 C57BL/6J 유전적 배경에서 Lysozyme M-강화 녹색 형광 단백질(LysM-eGFP) 마우스를 도출합니다. C57BL/6J 배경에서 LysM-EGFP 마우스와 MyD88-/- 마우스를 교배하여 LysM-EGFP× 골수성 분화 1차 반응 88 (MyD88)-/- 마우스를 도출합니다.
2. 사육장에 있는 집 쥐. 이 연구를 위해 동물들은 수술 전에 동물들을 그룹으로 수용하고 수술 후에는 단독으로 수용했습니다. 생후 10-16주 사이의 쥐를 사용하십시오.

2. 절제 피부 상처

1. 복강내 주사를 통해 각 마우스에 0.03mg/mL 부프레노르핀 염산염(~0.2mg/kg) 100μL 를 투여합니다.
2. 주사 후 20분 후, 2-4%의 이소플루란이 포함된 2-3리터(LPM)의 산소가 있는 챔버에 2-4마리의 마우스를 놓습니다. 마우스가 완전히 마취되면 2-4% 이소플루란이 포함된 2-3LPM 산소에 연결된 콧방울로 마우스를 한 번에 하나씩 옮깁니다. 엄지와 검지 사이의 각 뒷발을 단단히 꼬집어 마우스가 완전히 마취되었는지 확인합니다. 동물이 꼬집음에 반응하지 않으면 다음 단계로 진행하십시오.
3. 전기 이발기로 마우스 뒷면의 1인치 x 2인치 부분을 면도하고 깨끗한 물티슈나 거즈를 사용하여 털 깎기 부분을 제거합니다. 제모 로션은 과도한 염증을 유발할 수 있으므로 사용하지 마십시오.
4. 먼저 포비돈 요오드에 적신 거즈 10%로 마우스 뒷면을 청소한 다음 에탄올에 적신 거즈 70%로 마우스 뒷면을 청소합니다. 수술 부위의 중심에서 바깥쪽으로 이동하여 나선형 패턴으로 해당 부위를 청소합니다. 수술 전에 수술 부위가 마를 때까지 약 1분 정도 기다립니다.
5. 면도한 마우스 뒷면을 두 손가락 사이로 느슨하게 잡고 준비된 수술 부위 중앙에 멸균 6mm 펀치 생검을 단단히 누릅니다. 피부를 팽팽하게 당기지 마십시오.
   1. 펀치 생검을 비틀어 윤곽의 적어도 한 부분에서 피부를 완전히 절단하는 피부에 원형 윤곽을 만듭니다. 밑에 있는 근막이나 조직을 자르지 않도록 주의하십시오.
   2. 멸균 가위와 집게를 사용하여 펀치 생검에 의해 각인된 원형 패턴에 따라 표피와 진피를 자릅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
6mm 일회용 생검 펀치	인테그라 밀텍스	33-36
부프레노프린 염산염 주사 가능	서양 의료 공급	7292	0.3 mg/mL
C57BL/6J 마우스	잭슨 라브라토리	664
LysM-eGFP 마우스	토마스 그라프, 알버트 아인슈타인 뉴욕 대학	해당 없음
MyD88 KO 마우스	잭슨 라브라토리	9088
부직포 스폰지	AMD- Ritmed Inc	A2101-채널	5cm × 5cm
포비돈 요오드 10% 용액	애플리케어	697731

호 년 의 의