Detection of Bacterial Adherence to Host Cells Using Fluorescence Imaging(형광 이미징을 사용한 숙주 세포에 대한 박테리아 부착 감지)

Abstract

출처: Yang, J., et al. 숙주 세포에 대한 박테리아 부착에 대한 자동화된 고처리량 감지. J. Vis. 특급 (2021년)

이 비디오는 형광 현미경 기반 이미징을 사용하여 숙주-병원체 상호 작용의 역학을 연구하기 위해 상피 세포 배양에 대한 GFP 태그 박테리아 부착을 평가하는 박테리아 부착 분석을 보여줍니다.

Protocol

1. 세균 부착 및 숙주 세포 염색

1. 먼저 파종된 A549 셀 단층을 따뜻한 1x PBS로 3회 세척합니다. 세척할 때마다 각 웰에 1x PBS 100μL를 첨가하고, 위아래로 3회 부드럽게 피펫팅한 다음, 1x PBS를 폐기하거나 첨가 후 10초 동안 기다린 다음 진공 청소기로 1x PBS를 제거합니다. 박테리아 결합의 동역학을 측정하려면 원하는 농도의 박테리아 현탁액 100μL가 있는 셀을 서로 다른 MOI(0, 1, 10 및 100)로 오버레이합니다. 200 x g에서 10분 동안 박테리아를 스핀다운하고 감염된 A549 세포를 37°C, 5% CO₂에서 추가로 1시간 동안 배양합니다.
   메모: 이 실험에서 각 조건은 기술적 삼중을 가졌습니다.
2. 위에서 설명한 대로 따뜻한 1x PBS로 단층을 5회 세척하여 결합되지 않은 박테리아를 제거합니다. 100μL의 4% 포름알데히드(1x PBS)를 96웰 플레이트의 각 웰에 추가하여 세포를 고정합니다. 플레이트를 얼음 위에 15분 동안 그대로 둔 다음 1x PBS를 사용하여 고정 용액을 세 번 씻어냅니다.
3. 핵을 염색하기 위해 50ng/mL의 4',6-디아미디노-2-페닐린돌(DAPI)을 첨가하고 RT에서 10분 동안 배양합니다. 배양 후 1x PBS를 사용하여 웰을 세 번 세척합니다. 감염된 A549 세포를 100μL의 1x PBS로 덮어 건조를 방지합니다. 다음 단계를 위해 처리하거나 어두운 곳에서 최대 2일 동안 4°C에서 플레이트를 보관하십시오.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PBS 10배	폭스바겐	45001-130
4",6-디아미디노-2-페닐린돌(DAPI)	써모 피셔	62248	숙주 세포 염색 염료
96웰 플레이트	코 닝	3882	절반 면적 우물, 평평한 투명 바닥
A549 셀	증권 시세	CCL 185	포유류 세포주
원심 분리기	에펜도르프	5810R
OD600 딜루 광도계	임플렌
전형적인 콩 육수	그로우셀	MBPE-4040
F-12K 중형	증권 시세	302004	A549 세포 배양 배지
소 태아 세럼	코 닝	35-016-이력서