방법 논문

Mycobacterium tuberculosis를 가진 단핵구 유래 세포의 완전히 분화된 대식세포 감염 모델

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

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출처: Mily, A., et al. M1 및 M2 인간 단핵구 유래 세포의 분극 및 Mycobacterium tuberculosis 감염 시 유세포 분석을 사용한 분석. (2020).

이 비디오는 인간 M1 및 M2 편광 단핵구 유래 대식세포에서 Mycobacterium tuberculosis 감염에 대한 반응을 연구하는 방법을 보여줍니다. 유세포 분석을 사용하면 감염된 대식세포 집단과 감염되지 않은 대식세포 집단과 관련된 다양한 표면 마커를 연구

할 수 있습니다.

프로토콜

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1. 단핵구 유래 세포의 Mtb 감염

참고: 다음 단계는 BSL-3 시설에서 수행해야 합니다.

  1. Mycobacterium tuberculosis(Mtb) 펠릿을 새로운 멸균 50mL 튜브에 무혈청 RPMI 배지에 재현탁하고 최종 박테리아 농도를 약 5 x 106 CFU/mL로 조정합니다.
  2. 단핵구 유래 세포를 포함하는 6-well 플레이트에서 세포 배양 배지를 제거합니다. 각 웰에 무혈청 RPMI 배지 1mL를 추가합니다. 웰당 1mL의 박테리아 현탁액을 추가하여 감염 다중성(MOI) 5:1, 즉 2mL/웰에서 106개의 대식세포당 5 x 106CFU를 얻고 37°C 및 5% CO2에서 4시간 동안 플레이트를 배양합니다.
  3. 감염 후 1mL의 멸균 세척 버퍼로 세포를 3회 세척하여 세포외 박테리아를 제거합니다. 접시를 기울이고 모서리에서 전체 세탁 버퍼를 조심스럽게 제거합니다. Mtb에 감염된 단핵구 유래 세포를 항생제 없이 2mL의 RPMI complete 배지에 재현탁시키고 유세포 분석을 진행하거나 유세포 분석 전에 24시간(또는 다른 시점) 동안 세포를 배양합니다.

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공개 사항

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선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
8웰 챔버 슬라이드랩텍154534
RPMI 1640생명 기술 공사SH30096.01
IFN-γ페프로텍300-02
나-피루브산GE 헬스케어 생명과학SH300239.01
L-글루타민GE 헬스케어 생명과학SH30034.01
Falcon 6웰 플랫 바텀 플레이트코닝 생명과학353046
소 태아 혈청(FBS)시그마-알드리치F7524
GM-CSF페프로텍300-03
년 월 년 년

재인쇄 및 허가

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태그

TLR 2M1 M2

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