숙주 상피 세포에 대한 박테리아 부착에서 Vitronectin의 역할을 연구하기 위한 분석

초록

출처: Singh, B. et al., 세균 접착 및 혈청 저항성에서 비트로넥틴의 역할을 연구하기 위한 분석. J. Vis. 특급 (2018년)

이 비디오에서는 헤모필루스 인플루엔자가 숙주 상피 세포에 순응하는 과정에서 비트로넥틴의 역할을 연구하기 위한 분석을 보여줍니다.

프로토콜

1. 상피 세포에 대한 박테리아의 Vn 의존적 부착에 관한 연구

1. 10%(vol/vol) 태아 송아지 혈청(FCS)(완전 배지) 및 5μg/mL 겐타마이신이 보충된 F12 배지가 있는 75cm² 조직 배양 플라스크에서 A549 세포(유형 II 폐포 상피 세포)를 배양합니다. 37°C에서 5% CO₂가 포함된 인큐베이터에서 80% 융합이 이루어질 때까지 3일 동안 플라스크를 배양합니다(포화도는 도립 현미경을 사용하여 세포의 표면 범위를 시각화하여 추정할 수 있음). 다음 4단계는 분석을 위해 상피 세포를 준비하는 방법을 설명합니다.
   1. 플라스크의 세포 단층을 PBS 20mL로 부드럽게 소용돌이치며 두 번 세척합니다. 플라스크 표면에서 세포를 분리하려면 세포 분리 효소 용액 2mL를 추가하고 37°C에서 5분 동안 플라스크를 배양합니다. 손바닥으로 플라스크를 두드려 플라스틱 표면에서 모든 세포를 분리합니다. 세포 덩어리를 분산시키기 위해 피펫을 위아래로 몇 번 움직입니다.
   2. 플라스크에 F12 complete medium을 18mL 추가하고 전체 세포 현탁액을 50mL 멸균 Falcon 튜브로 옮깁니다. RT에서 200 x g에서 5분 동안 세포 현탁액을 원....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
5mL 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브	BD 팔콘	60819-138	12 × 75mm 스타일
5% CO2 공급 인큐베이터	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	BBD6220
6mL 폴리스티렌 라운드 바닥 튜브	폭스바겐	89000-478	12 × 75mm 스타일 캡 포함
24웰 플레이트	BD 팔콘	08-772-1H	세포 배양 등급
75cm2 조직 배양 플라스크	BD 팔콘	BD353136	통풍
A549 세포주 인간	시그마-알드리치	86012804-1VL
세포 박리 효소(Accutase)	시그마-알드리치	A6964-500ML	세포 배양 등급
소 혈청 알부민(BSA)	시그마-알드리치	A2058 (영어	세포 배양에 적합
F12 미디엄	시그마-알드리치	D6421	세포 배양 등급
송아지 태아 혈청(FCS)	시그마-알드리치	12003년	세포 배양에 적합
혈구계	마리엔펠트	640210
조직 배양 플라스크	BD 팔콘	3175167	75cm2
인간 혈장에서 추출한 비트로넥틴(Vn)	시그마-알드리치	V8379-50UG	세포 배양 등급

) 년 ) 개 시리즈