Lipopolysaccharide-Induced Inflammatory Exudate Collection을 위한 에어 파우치 마우스 모델

초록

출처: Lu, Q., et al. 마우스에서 호중구의 이동 및 침투 감지. J. Vis. 특급(2020).

이 비디오는 생쥐의 피하 조직에서 공기 주머니를 생성하고 생체 내에서 지질다당류 투여에 대한 반응으로 염증성 삼출물을 수집하는 절차를 설명합니다.이 비디오는 공기 주머니의 호중구 침투 분석도 다룹니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 에어 파우치 분석

1. 첫 번째 공기 주입
   1. 0일차에 가스 마취실에서 2L/min의 속도로 5% 이소플루란이 포함된 마우스를 3분 동안 완전히 마취하고 0.5L/min.
      의 속도로 2% 이소플루란이 포함된 단일 호흡 장치에서 각 마우스의 마취를 유지합니다. 메모: 마우스가 챔버에서 단일 호흡 장치로 이동하기 전에 발가락을 꼬집어 충분한 마취 깊이를 보장합니다. 발가락이 끼었을 때 다리가 움직이지 않아야 합니다.
   2. 5mL 주사기에 부착된 0.22μm 필터를 사용하여 3mL 부피의 살균된 공기를 얻습니다.
   3. 핀셋으로 마취된 마우스의 뒷피부를 들어 올리고 26G x 3/8" 바늘을 사용하여 3mL의 멸균된 공기를 피하에 주입합니다.
   4. 치료 후 호흡 장치에서 마우스를 제거하십시오. 쥐가 움직이기 시작할 때까지 살아 있는지 확인하기 위해 쥐를 모니터링합니다.
2. 두 번째 공기 분사
   1. 3일차에 섹션 1.1에 설명된 대로 공기 주머니를 유지하기 위해 이전에 설정된 공기 주머니에 추가로 3mL의 살균된 공기를 주입합니다.
3. 치료
   1. 6일째, 희생 전 6시간 전에 에어 파우치에 다양한 트리트먼트를 주입합니다. 1mL의 인산염 완충 식염수(PBS)를 음성 대조군으로 주입합니다. 국소 염증을 유도하기 위해 1μg/mL LPS 1mL를 양성 대조군으로 주입합니다.
   2. 가스 마취실에서 2L/분의 속도로 5% 이소플루란이 포함된 마우스를 3분 동안 완전히 마취하고, 0.5L/분의 속도로 2% 이소플루란이 포함된 단일 호흡 장치에서 각 마우스의 마취를 유지합니다.Table of Materials.
      에 따라 세척 버퍼를 준비합니다. 메모: 마우스가 챔버에서 단일 호흡 장치로 이동하기 전에 발가락을 꼬집어 충분한 마취 깊이를 보장합니다. 발가락이 끼었을 때 다리가 움직이지 않아야 합니다.
   3. 각 에어 파우치에 대해 1mL의 세척 버퍼로 에어 파우치를 세척하고 15mL 원심분리 튜브에 염증성 삼출물을 수집합니다. 세척 버퍼 2mL로 공기 파우치를 세척하고 동일한 원심분리기 튜브에 염증성 삼출물을 수집합니다.
   4. RT에서 10분 동안 100 x g에서 원심분리기. 상층액을 버리고 1mL의 세척 버퍼에 세포를 재현탁합니다. 자동 혈액학 분석기를 사용하여 호중구 비율을 정량화할 세포 수를 세십시오.
      메모: 그림 1에서 대표적인 결과를 참조하십시오.

결과

그림 1: 에어 파우치 분석의 대표적인 결과. (A) 에어 파우치 분석의 그림. (B) 공기 주머니 분석에서 백혈구 부분 집합 침투의 대표적인 결과. PBS: 제어; LPS: 1μg/mL LPS. 데이터는 SD± 평균으로 표시됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
100% 에탄올	베이징 화학 공사
100% 메탄올	베이징 화학 공사
15 mL 원뿔형 폴리프로필렌 원심분리기 튜브	송골매	송골매
23 G x 1 1/4" 바늘	BD (영어)	제305120
26 G x 3/8" 바늘	BD (영어)	제305110
30G x 1/2" 바늘	BD (영어)	305106
5 mL 주사기	BD (영어)	Z683574
50 mL 원뿔형 폴리프로필렌 원심분리기 튜브	송골매	번호 14-432-22
가스 마취 시스템	ZS 디추앙	ZS-MV-IV
인산염 완충 식염수(PBS), 1×			90% ddH2O와 10%(v/v) 10×PBS 혼합, 오토클레이브
인산염 완충 식염수(PBS), 10×			200mL ddH2O에 NaCl 16g, KCl 0.4g, Na2HPO4·2H2O 2.88g, KH2PO4(무수) 0.48g을 용해하고 pH 7.4를 조정하고 오토클레이브 처리합니다
지방다당류(LPS)	시그마	L3012
Wash Buffer in Air Pouch 분석			HBSS로 0.5M EDTA를 10mM로 희석

호 호 시리즈 .