보조 유도 관절염 마우스 모델을 생성하는 기술

초록

출처: Lu, Q., et al. 생쥐에서 호중구의 이동 및 침투 감지. J. Vis. Exp. (2020).

이 비디오는 쥐 모델에서 보조제 유발 관절염을 생성하는 방법을 보여줍니다. Complete Freund's adjuvant(CFA)는 마우스의 발목 관절과 관절 주위 부위에 주입됩니다. CFA는 면역 체계를 활성화하여 호중구 침투와 과장된 염증을 유발합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 보조제 유발 관절염(AA) 마우스 모델의 유도

1. 최소 5초 동안 볼텍싱하여 완전한 Freund's adjuvant(CFA)를 현탁시킨 다음 100μL의 현탁액을 인슐린 주입기로 끌어들입니다.
   메모: 무균 상태를 보장하기 위해 실험에 완전히 새로운 CFA를 사용하는 것이 좋습니다.
2. 설명된 대로 마우스를 마취합니다.
3. 선택한 발을 표시하고 발목 관절 공간에 20μL의 CFA를 주입합니다. 선택한 발의 관절 주위 지점 4개(총 80μL)에 20μL의 현탁액을 주입합니다.
4. 호흡 장치에서 마우스를 제거하고 처리 된 마우스를 새 챔버에 넣습니다. 쥐가 움직일 수 있는 능력을 회복할 때까지 숨을 쉬
고 있는지 모니터링하십시오.
5. 3일마다 포켓 두께 측정기를 사용하여 발목 관절 직경을 측정하여 관절 직경을 평가합니다(그림 1A).
6. 3일마다, 관절염 점수 기준에 따라 관절염의 중증도를 평가한다 (그림 1C): 0, 정상, 홍반 및 부종의 증거 없음; 1, 족근 또는 발목 관절에 국한된 가장 가벼운 관절염, 홍반 및 가벼운 부기; 2, 발목에서 족골까지 확장되는 중등도의 관절염, 홍반 및 가벼운 부기; 3, 발목에서 중족골 관절까지 확장되는 중증 관절염, 홍반 및 중등도의 부종; 4, 가장 심한 관절염, 홍반, 심한 부종은 발목, 발, 손가락 또는 팔다리의 강직증을 포함합니다.

결과

그림 1: 보조제 유도 관절염(AA) 마우스 모델의 대표적인 결과. (A) 발목 관절 직경은 포켓 두께 측정기를 사용하여 측정했습니다. (B) 관절 부종은 발목 관절 직경(n = 7)에 따라 평가되었습니다. (C) 각 관절염 점수의 사진. (D) 관절염의 중증도는 0-4점(n=7)의 척도로 등급이 매겨졌다. 데이터는 SD± 평균으로 표시됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
15 mL 원뿔형 폴리프로필렌 원심분리기 튜브	송골매	14-959-53ᅡ
23 G x 1 1/4" 바늘	BD (영어)	제305120
26 G x 3/8" 바늘	BD (영어)	제305110
30G x 1/2" 바늘	BD (영어)	305106
컴플리트 프로인트의 보조제, 10 mg/ml	시그마	1002036152
Eppendorf Microtubes, 1.5 mL	시그마	Z606340
다이얼 두께 게이지	미쓰토요	7301
Shu Rui U40 일회용 멸균 인슐린 주사 바늘 1 mL	BD (영어)	328421

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