방법 논문

감염된 쥐 위장에서 헬리코박터 파일로리 부하의 정량화

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

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출처: D'Costa, K. et al., 헬리코박터 감염 및 위 병리학의 마우스 모델. J. Vis. 특급. (2018년)

이 비디오에서는 감염 후 생쥐의 위 조직에서 헬리코박터 파일로리 부하를 정량화하여 집락화를 확인하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

프로토콜

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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 감염 후 위장의 세균 집락화 확인

  1. 위장에서 H. pylori의 실행 가능한 계수
    1. 감염된 쥐의 위장에서 콜로니 계수를 수행하기 전에 멸균 HBA 플레이트에 추가 항생제(200μg/mL 바시트라신 및 10μg/mL 날리딕산)를 보충합니다.
    2. 오토클레이브 가능한 폴리프로필렌 마이크로 유봉을 사용하여 수동으로 또는 기계적 해리 기기를 사용하여 위 단면을 균질화합니다(재료 표 참조).
    3. 생성된 위 균질액의 중복 연속 희석(10-1-10-2)을 멸균 BHI.
      에서 준비합니다. 메모: 희석은 감염에 사용되는 주어진 H. pylori 균주에 대해 얻은 일반적인 박테리아 부하와 감염 기간에 따라 결정해야 합니다. 희석되지 않은 샘플도 사용할 수 있습니다.
    4. 사전 건조된 HBA 플레이트(참고: 단일 콜로니의 격리를 보장하기 위해 HBA 플레이트는 사용하기 전에 10-15분 동안 생물학적 안전 캐비닛 또는 37°C 인큐베이터에서 가열 및 건조해야 함)를 3개 또는 4개의 세그먼트로 나눕니다. Miles and Misra 기법을 적용하여 각 희석액 10-100mL를 한천 플레이트의 일부에 추가하고 멸균 플라스틱 루프를 사용하여 펴 바릅니다.
    5. 플레이트를 건조시킨 다음 혐기성 가스 용기에 거꾸로 된 위치(뚜껑이 아래를 아래로)에 놓습니다. 항아리의 습도를 유지하려면 물이 담긴 페트리 접시를 포함하십시오.
    6. 군체가 형성될 때까지 37°C에서 항아리를 배양합니다(일반적으로 4-7일).
    7. 10개에서 100개 사이의 고립된 콜로니를 포함하는 세그먼트를 열거합니다.
      참고: 플레이트의 H. pylori 군집과 H. felis 군체는 표준 우레아제, 카탈라아제 및 산화효소 검사를 사용하여 쥐 위 미생물총의 다른 구성원과 구별할 수 있습니다. H. pylori와 H. felis는 세 가지 검사 모두에서 양성입니다.
    8. 다음 공식을 사용하여 박테리아 부하를 (CFU/g of tissue)로 계산합니다.
      [(계수된 평균 콜로니 수) ×(희석 계수) x (도금 부피)]/(위 중량).

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공개 사항

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선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
세균 시약
옥소이드 블러드 한천 베이스 No.2Thermo Fischer ScientificCM0271B멸균하기 전에 탈이온화된 물에 용해시키십시오.
프리미엄 제세균 말 혈액호주 윤리적 생물학제(Australian Ethical Biologicals)PDHB100
Bacto 브레인 하트 인퓨전 브로스BD 생명과학237500멸균하기 전에 탈이온화된 물에 용해시키십시오.
CampyGen 가스 팩Thermo Fischer ScientificCN0035A/CN0025A
항생제
반코마이신시그마 알드리치V2002-1G탈이온수에 용해
폴리믹신 B시그마 알드리치P4932-5MU탈이온수에 용해
트리메토프림(≥98% HPLC)시그마 알드리치T7883100%(절대) 에탄올에 용해
암포테리신Amresco (아스트랄 사이언티픽)E437-100MG탈이온수에 용해
Bacillus licheniformis에서 추출한 바시트라신시그마 알드리치나0125탈이온수에 용해
Naladixic 산시그마 알드리치N8878탈이온수에 용해
장비 및 플라스틱 제품
Oxoid 혐기성 단지Thermo Fischer ScientificHP0011/HP0031
COPAN 파스퇴르 피펫Interpath 서비스200CS01
Eppendorf 5810R 원심분리기2,200rpm에서 4°C에서 10분 동안 원심분리하여 박테리아 펠릿 수집
파라필름 M베미스, VWRPM996
Eppendorf micropestle 1.2 - 2 mL tube용시그마 알드리치Z317314위 균질화에 사용되는 오토클레이브 폴리프로필렌 유봉
GentleMAC 디스 포메이터밀테니 바이오텍Tel.: 130-093-235마우스 위 조직에 대해 사전 설정된 gentleMACS 프로그램 사용
M 튜브(주황색 캡)밀테니 바이오텍Tel.: Tel.: 30-093-236
Qubit 형광측정기Thermo Fischer ScientificQ33216
멸균 플라스틱 루프랩서브LBSLP7202
년 버전 년 (영문)

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태그

Miles Misra

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