동종 골수 및 비장 세포 이식을 통한 마우스 모델에서 이식편 대 숙주 질환 유도

초록

출처: Buchele, V., et al. 살아있는 쥐에서 장 이식편 대 숙주 질환 및 미니 내시경 평가의 유도. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 동종 조혈모세포와 GvHD 유도 비장 동종성 T 림프구를 사용하여 치사량에 방사선 조사를 받은 마우스에서 장 이식편대숙주병(GvHD)의 유도를 보여줍니다. 이 프로토콜은 중증 급성 장 GvHD 모델을 확립하여 질병의 메커니즘을 이해하고 혁신적인 치료 옵션을 개발하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. GvHD 유도

1. Day 0: 수혜자 마우스의 전신 조사
   1. 생후 10주 이상인 암컷 CD45.2+ H2kd+ BALB/c 마우스를 수혜자로 사용합니다.
   2. GvHD 유도 전에 수용 마우스의 무게를 측정하고 기록합니다.
      메모: 수혜자의 체중이 20g의 최소 체중인지 확인하십시오. 시작 체중은 GvHD 유도 및 진행 과정에서 개별 마우스의 체중 감소를 계산하기 위한 참조 값으로 사용됩니다.
   3. X선 조사기의 용기에 최대 5마리의 마우스를 놓습니다.
   4. 전신 조사로 마우스에 8Gy의 X-ray를 1회 조사합니다. Cs137을 방사선 소스로 사용하십시오.
2. 1일차: T-세포가 고갈된 골수를 조사한 마우스의 재구성
   메모: 동종 골수 세포의 이식은 섹션 1.2에 요약되고 자세히 설명된 바와 같이 방사선 조사 후 24시간 이내에 이루어져야 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
BIOBEAM 2000 감마 조사기	감마 서비스 Meical GmbH
인산염 완충 식염수(PBS)	시그마-알드리치 주식회사 LLC.	D8662-6x500ML
Semken 집게 (길이 : 13cm, 톱니 모양, 곡선 팁)	정밀 과학 도구	11009-13
경화 된 가위 (길이 : 8,5cm, 직선 팁, 절삭 날 : 24mm)	정밀 과학 도구	14090-09
RPMI-1640 미디엄	시그마-알드리치 주식회사 LLC.	R8758-500ML
피하 주사 바늘 (26G)	B. 브라운 멜숭겐 AG	4657683
1mL 주사기	B. 브라운 멜숭겐 AG	9166017V
50 mL 튜브	Sarstedt Ag & Co.KG	6,25,47,254
40 μm 메쉬 스크린이 있는 셀 스트레이너	BD 팔콘	352340
멸균 내부를 가진 인슐린 주사기 (30G)	BD (영어)	324826
Pan T 세포 분리 키트 II, 마우스	밀테니 바이오텍 GmbH	Tel.: 130-095-130	비장 T 세포를 분리하기 위한 자석 세포 분리
CD90.2 MicroBeads, 마우스	밀테니 바이오텍 GmbH	Tel.: 130-049-101	T 세포가 고갈된 골수 세포를 분리하기 위한 자석 세포 분리
생검 겸자	칼 스토츠 SE &Co KG	61071 ZJ	대장내시경 검사를 위한 실험 설정의 일부
에틸렌디아민테트라아세트산이나트륨염이수화물(Na2EDTA)	Carl Roth GmbH & Co.KG	8043.2	ACK 용해 버퍼의 성분
Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45.2 항체 (clone: 104; lot: B252126; RRID: AB_493731)	바이오레전드	109822
PE/Cy7 anti-mouse CD45.1 항체 (clone: A20; lot: B217246; RRID: AB_1134168)	바이오레전드	제110730
APC/Cy7 anti-mouse CD8a 항체 (clone: 53-6.7, lot: B247008; RRID: AB_312753)	바이오레전드	100714
유공충 / 이소플루란	애브비 주식회사	나506
여과 소 세럼	(주)팬바이오텍	P40-47500	FACS 버퍼의 성분

년 년 호