Mesenteric Lymph Duct Cannulation in a Rat Model to Harvest 림프액을 수확합니다.

초록

출처: Trevaskis, N. L., et al. 장간막 림프관 캐뉼레이션 쥐 모델: 장 림프 약물 수송 평가에 적용. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 쥐의 장간막 림프관을 캐뉼레이션하는 기술을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 림프액에 존재하는 전체 성분에 직접 접근할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 장간막 림프관의 캐뉼레이션

1. 동물의 오른쪽이 작업자를 향하도록 놓습니다. 필요에 따라 수술용 현미경의 도움을 받거나 받지 않고 수술을 수행합니다.
2. 멸균 메스 날을 사용하여 정중선(xiphoid process)에서 흉곽(늑골 가장자리) 아래 약 2cm 아래 오른쪽 측면까지 직선으로 4cm 절개하여 복부 근육 벽의 최상층을 엽니다(그림 1B 참조).
3. 작은 수술용 가위로 복부 근육 벽의 나머지 층을 옆으로 4-5mm 옆으로 정중선, 오른쪽 옆구리까지 엽니다(그림 1B 참조).
4. 왼쪽 복부 근육 벽 아래의 소장을 수축시키고 생리식염수로 적신 멸균 거즈 2-3개를 사용하여 제자리에 유지합니다.
5. 장간막 림프관을 쉽게 시각화할 수 있도록 오른쪽 신장 높이에서 쥐의 등 아래에 수평으로 놓인 10ml 플라스틱 주사기 위에 쥐를 연결합니다.
6. 상장간막 림프관(superior mesenteric lymph duct)을 찾습니다: 직경이 약 0.5 - 1mm이고 오른쪽 신장에 수직이며 바로 상부에 있으며 장간막 동맥(맥동하는 짙은 적색 혈관, 그림 1C 참조)과 평행합니다.
   참고: 공복하지 않았거나 기름을 미리 투여한 쥐의 혈관은 흰색이고 불투명하며 상당히 반투명한 단식 쥐보다 시각화하기 쉽습니다.
7. 큰 상장간막 림프관과 장간막 동맥의 바로 꼬리 부위를 검사하여 두 번째로 더 작은 부속 림프관이 있는지 확인합니다. 림프관이 있는 경우, 장간막 림프관에서 흐르는 림프액 전체가 장간막 림프관에서 모이도록 관을 절단하고 초접착제로 막거나 림프관 주위에 봉합사를 묶어 림프관을 통한 림프의 흐름을 차단합니다.
8. 오른쪽 신장의 아래쪽 가장자리에 있는 신장 주위 지방층을 통해 한 쌍의 곧은 집게를 통과시키고 대정맥 바로 아래의 결합 조직층을 통해 상장간막 림프관과 평행한 방향으로 통과시킵니다.
9. 겸자의 끝을 사용하여 림프 캐뉼라를 잡고 한쪽 끝은 장간막 림프관에 바로 인접하고 다른 쪽 끝은 오른쪽 신장 수준에서 동물로부터 외부로 나오도록 하여 신장 주위 지방층을 통해 당깁니다.
10. 둔기 해부를 통해 장간막 림프관을 결합 조직과 지방 조직의 위에 놓인 층으로부터 분리하십시오. 림프관을 뚫거나 손상시키지 않도록 주의하세요.
11. 림프관을 분리한 후 마이크로 가위, 보석 세공인의 집게의 날카로운 끝 또는 25g 바늘로 림프관에 작은 구멍을 뚫습니다. 용기가 완전히 절단되지 않도록 주의하십시오.
12. 림프 캐뉼러가 에어 갭 없이 항응고 용액(주사기와 25G 바늘 사용)으로 완전히 채워져 있는지 확인합니다. 작은 집게를 사용하여 작은 구멍을 통해 장간막 림프관 내부에 약 2 - 4mm 길이의 림프 캐뉼러를 삽입합니다.
13. 몇 분 동안 림프 캐뉼라를 관찰합니다. 캐뉼러가 성공적으로 이루어지는 경우 캐뉼라의 자유 수집 끝에서 장 림프의 점진적인 흐름을 관찰합니다. 캐뉼레이션이 성공하지 못하면 1.8 - 1.12단계를 반복합니다.
14. 캐뉼러가 성공적으로 이루어지면 림프관 입구 구멍에 수의학 접착제를 한 방울 떨어뜨려 캐뉼라를 고정합니다. 과도한 수의학 접착제를 도포하여 혈관을 막지 않도록 주의하십시오.
15. 수의학 접착제가 굳을 때까지 기다리는 동안 몇 분 동안 림프의 흐름을 관찰하여 캐뉼레이션 절차가 성공적이었는지 확인합니다. 캐뉼레이션의 성공이 확실해지면 복강에 놓인 거즈 조각을 조심스럽게 제거하고 소장을 원래 위치에 놓습니다.
16. 림프 채취 튜브의 무게를 미리 측정하고, 림프 및 혈액 검체 채취를 위한 튜브에 라벨을 부착하고, 항응고 용액을 추가합니다. 충분한 항응고 용액을 첨가하여 멸균수 중 1 mg/ml EDTA 또는 수집된 림프 또는 혈액 내 10 - 20 IU/ml 헤파린의 최종 농도를 달성합니다.
17. 항응고제가 들어 있는 림프 채취 튜브(1.16단계)를 캐뉼라 끝에 배치하여 자유롭게 흐르는 림프를 수집합니다.
18. 다음으로, 재수화 용액 및/또는 제형의 주입을 위해 십이지장을 캐뉼레이트합니다.

결과

그림 1. (A) 림프관을 캐뉼링하기 위해 면도한 복부, (B) 림프관에 접근하기 위해 정중선에서 오른쪽 옆구리까지 4cm를 곧게 절개하여 열린 복부 근육벽, (C) 오른쪽 신장에 수직인 상장간막 림프관(노란색 원 안)의 사진.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
멸균 식염수	박스터 헬스케어	재질 보기 AHB 1307	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Baxter 100ml 식염수 백, 50개 상자가 있습니다
물 중 70% 에탄올	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
클로르헥시딘 글루코네이트 용액 (Microshield 4)	리빙스턴 국제공항	JJ60243L	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&검색 =JJ60243L
Betadine 용액	리빙스턴 국제공항	BU0510	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&검색 =BU0510
일리움 케타밀 (케타민 100 mg / ml)	프로벳 빅토리아	케타 I 1	http://www.provet.vom.au
헤파린(35mL 중 35000IU	시그마제약(SigmaPharmaceuticals)	337220	http://www.sigmaco.com.au
폴리에틸렌(PE) 캐뉼러 외경 0.96mm x 내경 0.58mm	마이크로튜브 확장	PE8050	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 PE 튜빙 0.96 x0.58 mm, 30 m
폴리에틸렌(PE) 캐뉼러 외경 0.8 mm x i.d. 0.5 밀리미터	마이크로튜브 확장	체육9658	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 PE 튜빙 0.8 x0.5 mm, 30 m
마커	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
수의학 접착제	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
23 게이지 바늘	리빙스턴 국제공항	DN23GX0.75LV	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX가 있습니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&검색=DN23GX0.75LV
25 게이지 바늘	리빙스턴 국제공항	DN25GX1.0LV	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX가 있습니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&검색= DN25GX1.0LV
주사기 1ml	리빙스턴 국제공항	T3SS01TA	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Terumo 주사기 1ml 슬립 투베르쿨린 100/박스가 있습니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&검색 =T3SS01TA
주사기 10ml	리빙스턴 국제공항	T3SS10SA	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 테루모 주사기 10ml 슬립 100/상자입니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&검색 =T3SS10SA
거즈 면봉	리빙스턴 국제공항	GSC075	모든 브랜드를 사용할 수 있으며 필요한 크기로 절단할 수 있습니다. 예를 들면 면 7.5x7.5cm, 8 겹으로 채워진 거 즈 면봉입니다. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&검색 =GSC075
발열 패드	라텍	무게1	온도를 37°C로 유지하는 모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 전amp파일은 Ratek 보온 트레이입니다.
수술용 현미경	자이스	제495005-0014-000	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Zeiss 스테미 2000-C와 스탠드 S 더블 스폿 및 KL 300 LED가 있습니다. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 x 작은 수술 용 가위	정밀 과학 도구(FST)	14060-09	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST 파인 가위, 9cm, 21mm 절삭 날, 날카롭고 곧은 가위가 있습니다. http://www.finescience.ca/ 특수 페이지/Products.aspx? 제품 ID=40&CategoryId=17
톱니 모양의 곡선 팁이있는 집게 2 개	정밀 과학 도구(FST)	11001-13	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 곡선 2.8x1.4mm 팁이 있는 FST 13cm 표준 패턴 집게가 있습니다. http://www.finescience.ca/ 특수 페이지/Products.aspx? 제품 ID=405&카테고리 ID=32

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