면역병리학 연구를 위한 쥐 모델의 십이지장 내 삽관(intraduodenal cannulation)

초록

출처: Trevaskis, N. L. et al., 장간막림프관 캐뉼레이션 쥐 모델: 장 림프 약물 수송 평가에 적용.J. Vis. 특급(2015년)

이 비디오는 쥐 모델에서 십이지장 내 삽관을 보여줍니다. 쥐를 마취 한 후 십이지장을 찾고 작은 구멍을 만듭니다. 끝이 비스듬한 J자형 캐뉼라를 조심스럽게 삽입하고 고정한 다음 절개 부위를 닫습니다. 캐뉼러형 쥐 모델은 면역병리학 연구를 위한 장 내 주입을 가능하게 합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 수술 전날 준비

1. 필요한 경우 수술 전날 밤에 쥐를 금식하십시오. 쥐가 물에 자유롭게 접근할 수 있는지 확인하십시오.
2. 쥐에게 투여할 용액을 준비합니다.
   1. 멸균 식염수 또는 Ringers 용액과 같은 재수화 용액을 준비합니다.
   2. 필요에 따라 마취액을 준비합니다. 여기에 설명된 실험에 사용된 마취제는 케타민 100mg/ml 1.9ml, 자일라진 100mg/ml 0.5ml, 아세프로마진 10mg/ml 0.2ml, 식염수 2.5ml를 결합하여 제조된 "칵테일 1"과 케타민 100mg/ml 1ml와 아세프로마진 10mg/ml 0.1ml로 구성된 "칵테일 2"로 구성되었습니다. 참고: 흡입형 이소플루란 또는 세보플루란은 더 오랜 기간 동안 수술용 마취면을 제공할 수 있으므로 선호될 수 있습니다.
3. 멸균수에 10mg/ml 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 식염수에 10IU/ml 헤파린을 함유한 항응고 용액을 준비하여 림프 캐뉼라를 세척합니다. 또한 경동맥 캐뉼라를 세척하기 위해 식염수에 2.5 - 10 IU/ml 헤파린을 함유한 항응고 용액을 준비합니다.
4. 십이지장에 삽입할 폴리에틸렌 캐뉼러를 준비합니다(0.96mm O.D, 0.58mm I.D.)
   1. 캐뉼러를 필요한 길이(일반적으로 십이지장 캐뉼라의 경우 25 - 30cm)로 자르고 멸균 수술용 칼날을 사용하여 캐뉼라 끝에 베벨을 놓습니다(그림 1 참조).
      메모: 이것은 캐뉼라 삽입의 용이성을 높이고 삽입 후 캐뉼라 막힘의 발생을 줄입니다.
   2. 캐뉼라의 작은 부분을 다시 고리를 만들고 라이터 또는 핫 플레이트로 가열한 다음 크기에 맞게 절단하여 십이지장 내 캐뉼라에 J자형 앵커 포인트를 배치합니다(그림 1 참조).
5. 림프 캐뉼러를 25G 바늘과 항응고 용액이 들어 있는 주사기에 부착합니다(1.3단계에서 준비). 림프 캐뉼러에 항응고 용액을 채우고 용액을 캐뉼라에 하룻밤(O/N) 그대로 두어 림프 채취 중 림프 캐뉼라의 혈전 형성 발생률을 줄입니다.
6. 림프 및 혈액 샘플 채취를 위한 튜브를 준비합니다. 림프 채취 튜브의 무게를 미리 측정하고, 림프 및 혈액 검체 채취를 위한 튜브에 라벨을 부착하고, 항응고 용액을 추가합니다. 충분한 항응고 용액을 첨가하여 멸균수 중 1mg/ml 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 수집된 림프 또는 혈액 내 10 - 20IU/ml 헤파린의 최종 농도를 달성합니다.

2. 수술 시작 직전의 준비

사항

1. 캐뉼러를 멸균 식염수 또는 항응고 용액으로 세척하여 캐뉼라가 특허인지 확인하십시오.
2. 수술 절차를 위해 쥐를 준비하십시오.
   1. 수술 및 샘플 채취 기간 동안 쥐를 마취합니다.
      1. 예를 들어, 25G 바늘에 부착된 1ml 주사기를 사용하여 쥐목 뒤쪽의 피부 주름에 1.5ml/kg의 칵테일 I(1.2.2단계)을 피하 주사하여 마취를 시작합니다. 25G 바늘에 부착된 1ml 주사기를 사용하여 필요에 따라 약 1시간마다 0.44ml/kg의 Cocktail 2(1.2.2단계부터)를 복강내 주사하여 마취를 유지합니다.
      2. 수술을 시작하기 전에 호흡수, 수염 움직임, 근육 긴장도 및 발을 꼬집는 것과 같은 자극에 대한 반응을 관찰하여 마취 깊이가 충분한지 확인하십시오. 필요에 따라 추가 마취를 시행합니다.
   2. 십이지장 캐뉼레이션을 위해 복부의 오른쪽을 포함하는 수술 부위의 털을 면도합니다.
   3. 포비돈 요오드 용액 또는 클로르헥시딘 용액과 70% 에탄올 스크럽을 사용하여 수술 부위를 무균 상태로 세척합니다. 각 부위에 대해 이 작업을 3회 반복하고 70% 에탄올로 최종 클렌징으로 마무리합니다.
3. 동물을 등쪽 누운 상태로 가열된 수술 패드(37°C) 위의 깨끗한 시트에 놓습니다.

3. 십이지장의 캐뉼레이션

1. 동물의 오른쪽이 작업자를 향하도록 놓습니다. 필요에 따라 수술용 현미경의 도움을 받거나 받지 않고 수술을 수행합니다.
2. 멸균 메스 날을 사용하여 정중선(xiphoid process)에서 흉곽(늑골 가장자리) 아래 약 2cm 아래 오른쪽 측면까지 직선으로 4cm 절개를 하여 복부 근육 벽의 최상층을 엽니다(그림 2B 참조).
3. 작은 수술용 가위로 복부 근육 벽의 나머지 층을 정중선까지 4-5mm 옆에서 오른쪽 옆구리로 엽니다(그림 2B 참조).
4. 왼쪽 복부 근육 벽 아래의 소장을 수축시키고 생리식염수로 적신 멸균 거즈 2-3개를 사용하여 제자리에 유지합니다.
5. 십이지장 캐뉼러를 재수화 용액으로 채워진 주사기(예: 10ml)에 부착합니다.
6. 십이지장을 소장의 밝은 분홍색(혈관이 더 많은) 부분으로 식별하고, 부드럽게 아래로 당기면 위가 드러납니다.
7. 멸균 2G 바늘을 사용하여 위와 십이지장(유문)의 접합부 아래 약 2cm 아래에 있는 십이지장에 작은 구멍을 뚫습니다.
8. 천공 구멍을 통해 십이지장 캐뉼라의 J자 모양의 갈고리 끝을 삽입합니다. 시아노아크릴레이트 접착제 한 방울로 제자리에 고정합니다.
9. 주입 펌프에 적재된 재수화 주사기에 캐뉼라를 부착하여 쥐의 수화를 시작합니다. 문헌에 따르면 재수화 속도는 0.5 - 3ml/hr 사이입니다.
10. 림프와 십이지장 캐뉼레이션이 완료된 후 복부 근육 벽의 절개 부위를 봉합사로 봉합합니다. 그런 다음 절개 부위를 따라 조직 접착제(시아노아크릴레이트)를 몇 방울 떨어뜨리고 절개 부위 양쪽의 피부를 함께 꼬집어 피부 절개 부위를 닫습니다.

결과

그림 1. 경동맥 또는 림프 캐뉼라의 비스듬한 끝 모양과 십이지장 캐뉼라의 J자형 비스듬한 끝 모양을 도식적으로 표현

한 것입니다.

그림 2. (A) 림프관을 캐뉼링하기 위해 면도한 복부, (B) 림프관에 접근하기 위해 정중선에서 오른쪽 옆구리까지 4cm를 곧게 절개하여 열린 복부 근육벽, (C) 오른쪽 신장에 수직인 상장간막 림프관(노란색 원 안)의 사진.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
멸균 식염수	박스터 헬스케어	재질 보기 AHB 1307	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Baxter 100ml 식염수 백, 50개 상자가 있습니다
물 중 70% 에탄올	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
클로르헥시딘 글루코네이트 용액 (Microshield 4)	리빙스턴 국제공항	JJ60243L	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Betadine 용액	리빙스턴 국제공항	BU0510	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
일리움 케타밀 (케타민 100 mg/ml)	프로벳 빅토리아	케타 I 1	http://www.provet.com.au/
일륨 자일라질(자일라진 100mg/ml)	프로벳 빅토리아	트로-3828	http://www.provet.com.au/
ACP 10 주사제(아세프로마진 10mg/ml)	프로벳 빅토리아	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
헤파린(35mL 중 35000IU)	시그마 제약	337220	http://sigmaco.com.au/
에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 디소듐 염 이수화물	시그마-알드리치	1644회	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Sigma의 EDTA의 이나트륨 염이 있습니다.
폴리에틸렌(PE) 캐뉼러 외경 0.96mm x 내경 0.58mm	마이크로튜브 확장	PE8050	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 PE 튜빙 0.8x0.5mm, 30m가 있습니다
폴리에틸렌(PE) 캐뉼라 외경 0.8mm x 내경 0.5mm	마이크로튜브 확장	체육9658	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 PE 튜빙 0.96x0.58mm, 30m가 있습니다
통치자	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
마커	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
담배 라이터	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
시아노아크릴레이트 접착제	어떤		모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다.
23 게이지 바늘	리빙스턴 국제공항	DN23GX0.75LV	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX가 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0.75LV
25 게이지 바늘	리빙스턴 국제공항	DN25GX1.0LV	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX가 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1.0LV
주사기 1ml	리빙스턴 국제공항	T3SS01TA	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Terumo 주사기 1ml 슬립 투베르쿨린 100/박스가 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
주사기 10ml	리빙스턴 국제공항	T3SS10SA	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 테루모 주사기 10ml 슬립 100/상자입니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
거즈 면봉	리빙스턴 국제공항	GSC075	모든 브랜드를 사용할 수 있으며 필요한 크기로 절단할 수 있습니다. 예를 들면 면 7.5x7.5cm, 8 겹으로 채워진 거 즈 면봉입니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
발열 패드	라텍	무게1	온도를 37°C로 유지하는 모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 전amp파일은 Ratek 보온 트레이입니다.
수술용 조명	하버드 기구	72-0215와 72-0267	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Harvard 장치 V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm)가 있습니다. http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
수술용 현미경	자이스	제495005-0014-000	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Zeiss 스테미 2000-C와 스탠드 S 더블 스폿 및 KL 300 LED가 있습니다. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
실크 봉합사	리빙스턴 국제공항	DTSK163019F4	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 다음과 같습니다. * 이 제품을 친구에게 이메일로 보내주세요. 3/8 서클 리버스 컷 실크 봉합사 3/0 스레드 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
메스 블레이드	정밀 과학 도구(FST)	10020-00	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST 메스 블레이드 #20이 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
메스 손잡이	정밀 과학 도구(FST)	10004-13	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 다음은 FST 메스 핸들 #4의 예입니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x 작은 수술 용 가위	정밀 과학 도구(FST)	14060-09	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST 파인 가위, 9cm, 21mm 절삭 날, 날카롭고 곧은 가위가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
톱니 모양의 곡선 팁이있는 집게 2 개	정밀 과학 도구(FST)	11001-13	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 곡선 2.8x1.4mm 팁이 있는 FST 13cm 표준 패턴 집게가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 x 지혈제	정밀 과학 도구(FST)	13010-12	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 모든 작업자가 지혈제를 사용하는 것은 아닙니다. 예를 들면 길이 20mm x 너비 1.3mm의 톱니 모양의 직선 팁이 있는 FST 12cm 마이크로 모기 지혈제가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x 봉합사 바늘 홀더	정밀 과학 도구(FST)	12001-13	모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 길이 16mm x 너비 1.9mm 팁이 있는 FST 13cm Hasley 바늘 홀더가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70

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