각막 손상을 검사하기 위한 자가면역 안구건조증 쥐 모델의 플루오레세인 염색

초록

출처: Hou Ahiua, et al. 안구 조직에서 효과 기억 T 세포가 증가하는 만성 자가면역 안구 건조증 쥐 모델. J.Vis. 특급 (2017년)

이 비디오는 쥐 모델에서 자가면역 안구건조증의 정도를 평가하기 위해 플루오레세인 염료를 사용하여 손상된 각막을 염색하는 방법을 보여줍니다. 염색된 콜라겐 섬유의 녹색 형광 반점은 각막 상피 손상 세포를 나타냅니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 안구건조증 증상 평가

플루오레세인 염색으로 각막 손상을 측정합니다.

1. 쥐 각막에 0.2% 플루오레세인 2μL를 추가합니다. 장갑을 낀 손가락으로 쥐의 눈꺼풀을 3회 수동적으로 개폐하여 눈 표면에 플루오레세인 염료를 펴 바릅니다.
2. 1분 후, 3mL 주사기(바늘이 부착되지 않음)로 식염수 1mL를 추출하고 각막 약 2-3mm 앞에 주사기를 놓고 식염수를 눈에 부드럽게 밀어 넣습니다.
3. 배경 조명을 끈 상태에서 안구 이미징 현미경의 코발트 블루 필터(즉, ~400nm) 아래에서 이미지를 획득합니다.
   메모: 이미지는 이후 이전 출판물에서 수정된 등급 시스템에 의해 분석되었습니다. 그런 다음 녹색 반점의 수, 면적 및 강도를 0에서 2까지 주관적으로 등급화하여 이미지를 분석했으며, 여기서 0은 부재를 나타내고, 1은 50개 미만의 반점이 반점 염색을 나타내고, 2는 50개 이상의 반점이 반점 염색을 나타냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약
플루오레세인 나트륨 용액	Bausch & Lomb 영국 제한	해당 없음
설비
링 라이트 조명기와 카메라가 있는 실체 현미경	칼 자이스	해당 없음