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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 실험적 자가면역 뇌척수염 또는 EAE 모델
- EAE 모델의 도입
- EAE 유도를 위해 10-13주 된 암컷 129S4/SvJae×C57BL/6 마우스를 사용합니다.
- 쥐에게 뇌형성 MOG35 - 55 (미엘린 희소돌기아교세포 당단백질) 펩타이드(200μg)의 피하 주사를 주사하고, 400μg Mycobacterium tuberculosis를 포함하는 200μl의 완전한 Freund's adjuvant (CFA)에 유화되었습니다.
메모: 질병을 유발하지 않는 음성 가짜 대조군으로, Mycobacterium tuberculosis를 동일한 부피 및 동일한 경로로 포함하는 불완전한 Freund 보조제를 사용할 수 있습니다.
- 그 후, 그리고 다시 24시간 후에 마우스에게 백일해 독소(총 0.2μg, 200μl 인산염 완충 식염수, PBS에 희석)를 복강내 주사합니다. 치료되지 않은 쥐를 대조군으로 사용하여 병에 걸린 동물과 건강한 동물을 비교할 수 있습니다.
메모: 또한 200 - 300 μg MOG35 - 55 펩타이드, CFA에서 300 - 500 μg의 결핵균 및 0.2 - 0.3 μg의 백일해 독소로 EAE를 유도할 수 있습니다.
- 주사 후 1주일부터 매일 마우스의 임상 증상을 검사합니다(1.2.1단계 참조)
메모: 질병 발병일은 실험마다 다르지만 우리 실험실의 조건에서는 11일경이므로 여기에서 14일은 질병 발병 후 3일로 정의됩니다. 본 연구에서 모든 마우스는 임상 증상을 보였습니다.
2. 마우스의 득점
- 임상 점수에 따라 임상 증상을 다음과 같이 분류합니다: 0) 징후 없음, 0.5) 꼬리의 원위 마비, 1) 꼬리의 완전한 마비, 1.5) 꼬리의 절뚝거림과 뒷다리의 경미한 쇠약, 2) 뒷다리의 절뚝거림 및 심한 쇠약, 2.5) 한쪽 뒷다리의 절뚝거리는 꼬리 및 마비, 3) 꼬리의 절뚝거림 및 양쪽 뒷다리의 마비, 3.5) 양쪽 뒷다리의 마비 및 한쪽 앞다리의 쇠약(이 점수를 받은 쥐는 지역 윤리 지침에 따라 안락사되었습니다).