Reporter Enzyme Fluorescence Imaging for In Vivo Tracking of Bacterial Infection(세균 감염의 생체 내 추적을 위한 Reporter Enzyme Fluorescence Imaging)

초록

출처: Sharan, R., et al. Reporter Enzyme Fluorescence를 사용한 마우스의 Mycobacterium tuberculosis 이미징. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 Mycobacterium tuberculosis 감염의 생체 내 검출을 위한 리포터 효소 형광(REF) 이미징을 보여줍니다. 감염된 마우스는 REF 이미징을 위해 복강내 기질을 주입합니다. 박테리아 β-락타마제 효소에 의해 가수분해되면 기질은 형광을 방출하며, 이를 감지하면 감염 평가에 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 균주 및 배양 조건

참고: 이 연구에서는 M. tuberculosis 균주 CDC1551이 사용되었지만, 모든 M. tuberculosis 균주도 동일한 방식으로 사용될 수 있습니다.

1. 37°C에서 M-OADC-TW(0.5% 글리세롤, 카탈라아제가 없는 10% 올레산 포도당 복합체, 0.05% Tween-80이 보충된 7H9 육수)에서 0.5(~ 0.2 x 10⁷ 집락 형성 단위 또는 CFU)의 OD₆₀₀까지 박테리아를 성장시킵니다.
2. 배양액을 M-OADC-TW(박테리아의 1:10 희석 시리즈)로 희석합니다. 박테리아의 희석액(10,⁵,^{10, 6}, 10,⁷, 10,⁸)을 선택적 7H11 플레이트에 삼중으로 플레이트화하여 CFU를 측정할 수 있도록 합니다.
3. 37 °C에서 4주 동안 또는 콜로니를 정확하게 계수할 수 있을....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이소플루란	베톤	501027
CNIR800	맞춤형 합성
Fatal Plus 솔루션	Vortech 제약 Ls, Ltd
7H9 미들브룩 수프	BD (영어)	271310
OADC 미들브룩 농축	BD (영어)	212351
스포르시딘		리-1284F
7H11 미들브룩 한천	BD (영어)	212203
매디슨 챔버
IVIS 스펙트럼	퍼킨 엘머	124262
XGI-8-가스 마취 시스템	퍼킨 엘머
리빙 이미징 소프트웨어	퍼킨 엘머
투명한 노즈콘	퍼킨 엘머
M. 결핵 균주 CDC1551	증권 시세
암컷 BALB/C 마우스, 5-7주	잭슨 연구소

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