Establishing an Infection Model Through Infection Model Through Microinjection of Gastric Organoids with Pathogenic Bacteria(위 오가노이드와 병원성 세균의 미세주입을 통한 감염 모델 구축)

초록

출처: Bartfeld, S. et al. 감염성 질환 모델로서의 오가노이드: 인간 및 쥐 위 오가노이드의 배양 및 헬리코박터 파일로리의 미세주입. J. Vis. 특급.(2015).

이 동영상은 위 병원균인 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)를 오가노이드 내강에 미세주입하여 위 오가노이드 감염 모델을 확립하는 방법을 보여줍니다. 이 모델은 위 세포의 감염으로 인한 변화를 연구하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. 오가노이드 배양의 통과

1. 1ml의 차가운 기저 배지를 우물의 기저 매트릭스에 추가합니다. 1ml 마이크로피펫을 사용하여 기저 매트릭스가 분해될 때까지 위아래로 격렬하게 피펫을 쏟아냅니다. 15ml 튜브에 옮깁니다. 얼음 위에 놓습니다.
2. 피펫에 오가노이드를 집어 넣고 위아래로 10회 격렬하게 피펫팅합니다. 오가노이드의 파괴는 눈으로 관찰할 수 있습니다.

2. 오가노이드 배양의 미세주입.

참고: 이 프로토콜은 오가노이드에 박테리아를 미세 주입하는 데 사용할 수 있습니다. 미세주사에 더 관대한 오가노이드로 주사를 시작하는 것이 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, 마우스 위 오가노이드는 표적화하기 쉬운 매우 큰 낭포성 오가노이드로 성장할 수 있습니다.

1. 재료 준비
   1. 제조업체의 권장 사항에 따라 마이크로피펫 풀러를 사용하여 유리 모세관을 두 개의 주사 바늘로 당깁니다. 마이크로피펫 풀러는 중간에 있는 유리 모세관을 가열하고 모세관을 두 부분으로 당겨 두 개의 유리 바늘을 생성합니다. 여러....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
보통
헤페스	인비트로젠	제15630-056
고급 DMEM/F12	인비트로젠	제12634-028
마트리겔, GFR, 페놀 프리	BD (영어)	356231
글루타맥스	인비트로젠	제35050-079	재고 농도 200 mM, 최종 농도 2 mM
나27	인비트로젠	제17504-044	재고 농도 50 x, 최종 농도 1x
N-아세틸시스테인	시그마-알드리치	A9165-5G	재고 농도 500 mM, 최종 농도 1 mM
쥐 재조합 EGF	인비트로젠	PMG8043	재고 농도 500 μg/ml, 최종 농도 50 ng/ml
인간 재조합 FGF10	페프로텍	100-26	재고 농도 100 μg/ml, 최종 농도 200 ng/ml
핀셋	네올랩스	2-1033	끝이 가는 핀셋은 조직에서 근육층을 제거하는 데 도움이 됩니다.
4 웰 멀티디쉬	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	144444	다른 멀티 디쉬를 사용할 수 있습니다. 이들은 외부 테두리가 낮고 매니퓰레이터가 더 많이 움직일 수 있기 때문에 미세 주입에 특히 도움이 되었습니다.
마이크로인젝터	나리시게	메신저 - 5B
실체현미경	라이카	MZ75
마이크로피펫 풀러	셔터 기기	플레밍 브라운 마이크로피펫 풀러
Cag A 항체	산타 크루즈	사우스캐롤라이나-25766

호 호 호 호 년 년 )