종양 특이적 항체의 In vivo 국소화를 평가하는 기법

초록

출처: Shivange, G., et al. 표적 항원 특이적 치료 항체의 종양 및 조직 분포 분석. J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오는 마우스 종양 이종 이식 모델에서 종양 특이적 항체의 생체 내 국소화를 연구하는 기술을 보여줍니다. 종양 형성을 위해 암세포를 마우스에 피하 주입하면 종양 특이적 수용체에 결합하는 형광 표지된 항체를 주입하여 이미징을 통해 항체 국소화를 생체 내에서 평가할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 항체의 발현 및 정제

1. 중국 햄스터 난소(CHO) 세포의 유지
   1. 유리 또는 일회용의 delong Erlenmeyer 플라스크를 사용하여 37°C에서 130rpm에서 5% CO₂로 진탕하는 시판되는 1x 글루타민 보충제가 보충된 FreeStyle CHO Media에서 CHO 세포를 성장시킵니다.
      메모: 교반을 증가시키고 흔들리는 조건에서 가스 전달을 개선하기 위해 통풍 캡이 있는 배플 플라스크를 사용하는 것이 좋습니다. 현저하게 감소된 항체 수율은 현탁액 배양의 제한된 교반으로 인해 일반 플라스크(non-baffled)에서 얻어졌습니다.
   2. >95%의 세포 생존율로 1-5 x 10⁶ cells/mL 사이의 세포 수를 유지합니다. 세포 수가 5 x 10⁶ cells/mL 이상으로 증가하면 세포를 분할합니다. CHO 세포가 0.2 x 10⁶ cells/mL 미만에 도달하지 않도록 하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
FreeStyle CHO 미디어	Gibco Life 기술	고양이 # 12651-014
안티 (100X)	Gibco Life 기술	고양이 # 15240-062
Anti-Clumping Agent (안티 응집제)	Gibco Life 기술	고양이 # 01-0057DG
BD 인슐린 주사기	BD 바이오사이언스	고양이 #329420
캘리퍼 IVIS 스펙트럼	퍼킨엘머	고양이 #124262
CHO CD 이피션트피드 B	Gibco Life 기술	고양이 #A10240-01
Corning 500 mL DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's medium)	코 닝	고양이 # 10-13-CV
코닝 500 mL RPMI 1640	코 닝	고양이 # 10-040-CV
Cy5 활용 항인간 IgG (H+L)	잭슨 이뮤노리서치	고양이 # 709-175-149
글루타맥스-I (100X)	Gibco Life 기술	고양이 # 35050-061
HiPure 플라스미드 Maxiprep 키트	인비트로젠	고양이 # K21007
HiTrap MabSelect SuRe 컬럼	GE 헬스케어	고양이 # 11-0034-93
주입	다카라 바이오사이언스	344
IRDye 800CW NHS 에스테르	리코어	고양이 # 929-70020
이소플루란, USP	코브트러스	고양이 # 11695-6777-2
윤활제 눈 연고	Lacri-Lube 새로 고침	고양이 #4089
마트리겔	코 닝	고양이 # 354234
PEI 트랜스펙션 시약	써모 피셔	고양이 # BMS1003A
Slide-A-Lyzer 투석 카세트	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	고양이 # 66333
Steritop 진공 필터	밀리포어 익스프레스	고양이 #S2GPT02RE
트립신-EDTA	Gibco Life 기술	고양이 # 15400-054
실험 모델: 세포주
인간: OVCAR-3	아메리칸 타입 컬처 컬렉션	ATCC HTB-161
인간: CHO-K 세포	실험실에서 안정적으로 변화	ATCC CCL-61
마우스: 4T1	UVA의 Chip Landen 박사의 친절한 선물
마우스: MC38	UMBC Suzanne Ostrand-Rosenberg 박사의 친절한 선물	STR 프로파일링을 통해 인증됨
마우스: MC38 hFOLR1	우리 실험실에서 생성됨 (본 논문)
실험 모델: 동물
마우스 : athymic 누드 Foxn1nu / Foxn1 +	엔비고	여러 주문
마우스: NOD.Cg Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ	잭슨 연구소	여러 주문

증권 시세 표시기) 시리즈