박테리아 세포 염색 및 면역학 연구를 위한 준비

초록

출처: Yang, J. et al., 숙주 세포에 대한 박테리아 부착의 자동화, 고처리량 검출.J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 적색 형광 염료를 사용하여 면역학 연구를 위한 박테리아 세포의 염색 및 준비를 보여줍니다. 염색된 박테리아는 숙주 세포 감염을 위한 원하는 박테리아 농도를 달성하기 위해 성장 배지에서 희석되고 재현탁되며, 이는 감염의 다양성을 나타냅니다.

프로토콜

1. 세균 성장 및 염색

1. 생물 안전 캐비닛, 생물 안전 레벨 2 실험실에서 모든 박테리아 작업을 수행하십시오.
2. 냉동 글리세롤 스톡에서 녹농균(PAO1), 대장균, 리스테리아 모노사이토제네스, 바실러스 서브틸리스 등을 포함한 모든 박테리아 배양액을 접종하고 37°C의 진탕 인큐베이터에서 250rpm으로 하룻밤 동안 유지되는 Tryptic Soy Broth(TSB, 3mL)에서 배양합니다.
3. 다음날, 하룻밤 배양을 1:100 희석하여 하강배양을 접종하고 TSB(1mL)에서 지수 단계로 3시간 동안 성장시키고 600nm(OD₆₀₀)에서 광학 밀도, OD를 측정하여 확인합니다.OD₆₀₀이 0.4-0.6 범위에 있는지 확인합니다.
4. 박테리아-숙주 부착 분석을 수행하기 전에 TSB-한천 플레이트에 박테리아 현탁액을 플레이트에서 연속적으로 희석하고 37°C에서 밤새 배양한 다음 콜로니 수에서 박테리아 콜로니 형성 단위(CFU)를 설정합니다. 녹농균의 경우 OD₆₀₀ 1.0은 2 x 10⁸ 생존 가능한 박테리아 세포/mL에 해당하고,....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PBS 10배	폭스바겐	45001-130
BactoView 라이브 레드	비오티움	40101	박테리아 staning 염료
원심 분리기	에펜도르프	5810R
대장균			실험실 재고
F-12K 중형	증권 시세	302004	A549 세포 배양 배지
소 태아 세럼	코 닝	35-016-이력서
L. 모노사이토제네스			NIST 컬렉션
OD600 딜루 광도계	임플렌
녹농균			Dr. Lori Burrows 실험실 주식
녹농균 ΔpilA			Dr. Lori Burrows 실험실 주식
S. 아갈락티아과			NIST 컬렉션
S. 아우레우스	베이	NR-46543
S. 아우레우스 ΔsaeR	베이	NR-48164
S. 루비다과			NIST 컬렉션
전형적인 콩 육수	그로우셀	MBPE-4040

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