말초 혈액 수집 및 혈장 분리를 위한 마우스 꼬리 싹둑 촬영 절차

초록

출처: Coats, J. S. et al., 사이토카인 형질도입 기질 세포주를 이용한 주입을 통한 환자 유래 이종이식편에서 외인성 사이토카인의 발현. J. Vis. 특급. (2017년)

이 비디오에서는 마우스 모델에서 말초 혈액을 수집하기 위해 꼬리를 자르는 절차를 보여줍니다. 수집된 혈액은 이후 추가 실험에 사용할 수 있는 별도의 혈장으로 원심분리됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스의 외인성 인간 사이토카인에 대한 연속 채혈 및 혈장 모니터링

1. 꼬리 싹둑싹둑을 통한 혈액 채취
   1. 생물 안전 후드를 소독하고 마우스 구속구, 가위 및 절차를 위한 기타 도구/용품을 조립합니다.
   2. 마우스를 고정 장치에 넣고 튜브를 고정하여 마우스 움직임을 최소화합니다.
   3. 꼬리와 수술용 가위를 이소프로필 알코올로 소독합니다. 꼬리에 국소 마취 크림을 바릅니다.
   4. 매우 날카로운 수술용 가위를 사용하여 쥐 꼬리 끝의 약 0.5 - 1mm를 잘라냅니다. 헤파린 처리된 모세혈관을 사용하여 약 80μL의 말초 혈액을 수집합니다.
      메모: 이 방법으로 6회 이상 혈액을 채취하는 경우, 꼬리 제거는 제거된 꼬리의 양에 비해 보수적으로 이루어져야 합니다. 가위가 꼬리를 따라 올라갈수록 지름이 커지고 출혈이 빨라지며 치유 시간이 더 오래 걸립니다.

2. 플라즈마 분리

1. 전구 주사기를 사용하여 혈액을 (모세관 밖으로 배출하기 위해) 혈액을 K₂EDTA 마이크로 테이너 튜브로 옮깁니다. 응고를 방지하기 위해 20 회 뒤집습니다 .
   메모: 일반적으로 꼬리 닙에서 혈액 응고가 빠르게 이루어집니다. 그러나 출혈이 ~ 2 분 이상 지속되면 응고를 돕기 위해 지혈 연필 / 파우더를 사용하십시오.
2. 제조업체의 지침에 따라 혈액 채취 튜브를 원심분리하고 추가 분석이 준비될 때까지 혈장을 저장(-20 °C)하기 위해 분취합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Canula를 사용한 동물 이식 가능한 나노 트랜스폰더	트로반	아이디-100B(1.25)
EMLA 리도카인 마취 크림 (동물 관리 시설을 통해 처방하여 구입)	처방전	처방전
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 인슐린 주사기 28G1/2	BD (영어)	#329461
BD Microtainer 튜브(K2EDTA 포함)	BD (영어)	#365974
원심 분리기	벡크만 쿨터	알레그라 X-15R
FisherBrand 모세관 (헤파린화)	피셔 사이언티픽	22-260-950
혈구계	어부	02-671-6
MACSQuant 분석기 10	밀테니 바이오텍	Tel.: 130-096-343
마우스 파이 케이지	브레인트리 사이언티픽, Inc.	MPC-1
마우스 테일 일루미네이터 레스트레이너	브레인트리 사이언티픽, Inc.	MTI 성병
권총 그립 임플란터	트로반	아이엠-300(1.25)
"NSG 마우스"끄덕임. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, 남성 또는 여성, 6 – 8	JAX 마우스	# 005557

주